[发明专利]一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法

权利要求书

1.一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法，其特征在于，具体的制备过程如下：

（1）孢子和种子的制备

用接种环挑取球形芽孢杆菌AKU218的菌丝体在PDA平板上划线，于恒温培养箱中培养，得到球形芽孢杆菌AKU218平板；

（2）α-猪去氧胆酸的微生物转化

从步骤（1）的球形芽孢杆菌AKU218平板上，挑取一环步骤（1）中制备的球形芽孢杆菌AKU218的菌丝体，接种在灭菌后的细菌培养基中，恒温震荡培养48-72小时，离心分离回收菌体；然后将回收菌体接种到含有α-猪去氧胆酸及β-氧化抑制剂 2,2’-Bipyridyl的无机盐培养基中发酵；

（3）转化产物的分离提纯

在步骤（2）中培养后的无机盐培养基中，添加等体积的乙酸乙酯进行抽提分离，分离后的产物经脱色纯化后为白色粉末状的β-猪去氧胆酸，且α-猪去氧胆酸转化为β-猪去氧胆酸的转化率为80%-90%。

2.根据权利要求1所述的一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法，其特征在于，步骤（1）中恒温培养箱中温度为28℃，培养时间为3-5天。

3.根据权利要求1所述的一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法，其特征在于，步骤（2）中α-猪去氧胆酸的微生物转化的具体步骤如下：

A.从步骤（1）的球形芽孢杆菌AKU218平板上，挑取一环步骤（1）中制备的球形芽孢杆菌AKU218的菌丝体，接种在灭菌后的细菌培养基中，于 28℃，120 rpm 条件下恒温震荡培养48-72小时，于3000 rpm条件下离心10分钟后，分离回收菌体；

B. 将步骤A所得的菌体分散于无机盐培养基中，所述无机盐培养基中加入已事先溶解的α-猪去氧胆酸及β-氧化抑制剂 2,2’-Bipyridyl，然后将上述无机盐培养基放入置有脱氧剂的密闭容器中，于28℃，120 rpm的厌氧条件下培养36-72小时。

4.根据权利要求3所述的一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法，其特征在于，步骤A中所述细菌培养基包括以下组分：胰蛋白胨5g/L，酵母膏5g/L，糖类1g/L，磷酸氢二钾1g/L。

5.根据权利要求3或4所述的一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法，其特征在于，步骤B中所述无机盐培养基包括以下组分：磷酸氢二钾1g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸铵1g/L，七水硫酸镁0.2g/L，氯化钠0.1g/L，二水氯化钙0.02g/L，七水硫酸铁0.01g/L，酵母膏0.25g/L。

6.根据权利要求5所述的一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法，其特征在于，步骤B中所述的α-猪去氧胆酸及β-氧化抑制剂 2,2’-Bipyridy事先溶解于乙醇中，其中α-猪去氧胆酸的浓度为0.1%-1.0%，β-氧化抑制剂 2,2’-Bipyridy的浓度为0.01%。