[发明专利]一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法

说明书

本发明公开了一种利用微生物转化制备β‑猪去氧胆酸的方法，该方法通过微生物转化将猪去氧胆酸在3位的羟基由α位转化为β位。步骤包括：孢子和种子制备；α‑猪去氧胆酸微生物转化；分离提纯。本发明方法操作简单，以资源丰富、价格低廉的α‑猪去氧胆酸为原料，通过生物转化获得β‑猪去氧胆酸，有利于实现β‑猪去氧胆酸的工业化生产，促进β‑猪去氧胆酸的开发利用。

技术领域

本发明属于微生物转化技术领域，具体的涉及一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法，是利用微生物将猪去氧胆酸在 3 位的羟基由 α位转化为β位。

背景技术

α-猪去氧胆酸（3α, 6α-二羟基胆烷酸，HDCA）经由猪胆汁提取、加工制成，具有降血脂、祛痰、镇咳作用。α-猪去氧胆酸对百日咳杆菌、白喉杆菌、金黄色葡萄球菌等有一定抑制作用，可用作消炎药，治疗慢性支气管炎、小儿病毒性上呼吸道炎症等。目前，α-猪去氧胆酸的提取和制备工艺较为成熟，工业上实现了规模性加工生产，基于其自身的特性，还可作为人工牛黄配方的重要原料，以及其他中药制剂成分，如药物清开灵等。

3β, 6α-二羟基胆烷酸（β-HDCA）是α-猪去氧胆酸的同分异构体，在天然猪胆汁中仅有微量存在，且目前β-猪去氧胆酸的制备主要通过化学法合成，工艺复杂、环境污染大，产量低，无法实现大规模生产。正是由于其生产条件受限，导致其应用也受限，目前β-猪去氧胆酸仅作为标准品和杂质对照品，在市面上少量出售，不能满足某些特殊行业的需求。

生物转化是利用生物体系（包括植物、微生物或动物组织的培养体系）或生物体系的相关酶制剂对外源有机底物某一特定部位或功能基团进行特异性的结构修饰以获得有价值产物的生理、生化反应。酶法具有化学法无法比拟的优点，如条件温和，化学、区域和立体选择性高，操作简单，环境友好等，因此，如何将生物转化技术运用于β-猪去氧胆酸的制备，是行业内目前亟需解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法，以解决上述背景中提出的，目前β-猪去氧胆酸的制备主要通过化学法合成，工艺复杂、环境污染大，产量低，无法实现规模化生产的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种利用微生物转化制备β-猪去氧胆酸的方法，其特征在于，具体的制备过程如下：

（1）孢子和种子的制备

用接种环挑取球形芽孢杆菌AKU218的菌丝体在PDA平板上划线，于28℃的恒温培养箱中培养，培养3-5天，得到球形芽孢杆菌AKU218平板。所述的球形芽孢杆菌AKU218属于现有菌种，不是本发明想要保护的范围，其菌种信息在此不作详细描述。

（2）α-猪去氧胆酸的微生物转化

A. 在无菌条件下，用消毒后的接种环，挑取一环步骤（1）中制备的球形芽孢杆菌AKU218的菌丝体，接种在灭菌后的细菌培养基中，于 28℃，120 rpm 条件下恒温震荡培养48-72小时，于3000 rpm条件下离心10分钟后，分离回收菌体；

B. 将步骤A所得的菌体分散于无机盐培养基中，所述无机盐培养基中加入已事先溶解的α-猪去氧胆酸及β-氧化抑制剂 2,2’-Bipyridyl，然后将上述无机盐培养基放入置有脱氧剂的密闭容器中，于28℃，120 rpm的厌氧条件下培养36-72小时。

（3）转化产物的分离提纯

在步骤B培养后的无机盐培养基中，添加等体积的乙酸乙酯进行抽提分离，分离后的产物经脱色纯化后为白色粉末状的β-猪去氧胆酸，且α-猪去氧胆酸转化为β-猪去氧胆酸的转化率为80%-90%。

进一步的，步骤A中所述细菌培养基包括以下组分：胰蛋白胨5g/L，酵母膏5g/L，糖类1g/L，磷酸氢二钾1g/L。