[发明专利]一种司美格鲁肽的纯化方法有效

专利信息
申请号: 202011039848.7 申请日: 2020-09-28
公开(公告)号: CN112175068B 公开(公告)日: 2021-06-25
发明(设计)人: 马亚平;付信;张凌云;戴政清;王宇恩;周迎春;王庆磊 申请(专利权)人: 深圳深创生物药业有限公司
主分类号: C07K14/605 分类号: C07K14/605;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/14
代理公司: 北京市诚辉律师事务所 11430 代理人: 范盈
地址: 518000 广东省深圳市南山区粤海街道大冲*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 美格 纯化 方法
【权利要求书】:

1.一种司美格鲁肽的纯化方法,其包括如下步骤:

1)获得固相合成方法制备得到的裂解树脂以及脱除保护基的司美格鲁粗肽,用含有机溶剂的磷酸盐缓冲溶液溶解司美格鲁肽粗肽;

2)取司美格鲁肽粗肽溶液用0.22μm有机滤膜过滤,收集滤液备用;

3)第一步纯化以反相填料为固定相,用含有机溶剂的磷酸盐缓冲溶液为A相,乙腈为B相,进行梯度洗脱,收集纯度大于95%,单杂小于0.8%的组分浓缩;所述的反相填料选自四烷基硅烷键合硅胶填料、八烷基硅烷键合硅胶填料;

4)第二步纯化以反相填料为固定相,稀醋酸溶液为A相,乙腈为B相,进行梯度洗脱,收集纯度大于99.5%,单杂小于0.1%的组分;所述的反相填料为十八烷基硅烷键合硅胶填料;

5)将浓缩后的样品进行冷冻干燥,获得司美格鲁肽;

每1L含有机溶剂的磷酸盐缓冲溶液通过以下方法制备,量取2mL磷酸倒入700-750mL水,用三乙胺调pH到6.5-9,加入150-250mL乙腈,用水定容到1L;

所述的纯化方法为去除司美格鲁肽消旋杂质的方法,所述的司美格鲁肽消旋杂质为H-D-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu-OCDA)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH【His1消旋】以及H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-D-Ala-Ala-Lys(AEEA-AEEA-γ-Glu-OCDA)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH【Ala18消旋】;

步骤3)中梯度洗脱的方法为B%:20%-40%,线性梯度洗脱60min;

步骤4)中梯度洗脱的方法为B%:30%-50%,线性梯度洗脱60min。

2.根据权利要求1所述的纯化方法,在步骤3)中有机溶剂为极性有机试剂。

3.根据权利要求2所述的纯化方法,在步骤3)中极性有机试剂为甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的纯化方法,步骤1)和步骤3)中有机溶剂的体积百分比为10%-30%;且步骤1)和步骤3)中有机溶剂体积百分比相差不高于10%。

5.根据权利要求1所述的纯化方法,步骤1)和步骤3)中有机溶剂的体积百分比为15-25%。

6.根据权利要求1所述的纯化方法,步骤3)中所述的反相填料的粒径在5-100微米之间。

7.根据权利要求1所述的纯化方法,步骤3)中所述的反相填料的粒径为10μm。

8.根据权利要求1所述的纯化方法,步骤4)中所述的反相填料的粒径在5-100μm之间。

9.根据权利要求1所述的纯化方法,步骤4)中所述的反相填料的粒径为10μm。

10.根据权利要求1所述的纯化方法,在步骤4)中所述的稀醋酸浓度为体积百分比为0.01%-1.0%。

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