[发明专利]一种司美格鲁肽的纯化方法

说明书

本发明涉及一种司美格鲁肽的纯化方法，其包括如下步骤：1)获得固相合成方法制备得到的裂解树脂以及脱除保护基的司美格鲁粗肽，用含有机溶剂的磷酸盐缓冲溶液溶解司美格鲁肽粗肽；2)取司美格鲁肽粗肽溶液用0.22μm有机滤膜过滤，收集滤液备用；3)第一步纯化以反相填料为固定相，用含有机溶剂的磷酸盐缓冲溶液为A相，乙腈为B相，进行梯度洗脱；4)第二步纯化以反相填料为固定相，稀醋酸溶液为A相，乙腈为B相，进行梯度洗脱；5)将浓缩后的样品进行冷冻干燥，获得司美格鲁肽。本发明方法以含有机溶剂的磷酸盐缓冲溶液溶解粗肽，溶解后的粗肽溶液pH更稳定不易析出，即避免了色谱柱和设备堵塞，又提高了分离效果。

技术领域

本发明涉及一种多肽药物的纯化技术领域，特别涉及司美格鲁肽的分离纯化方法，属于药物化学领域。

背景技术

中文名：司美格鲁肽

英文名：Semaglutide

CAS号:910463-68-2

分子式:C₁₈₇H₂₉₁N₄₅O₅₉

分子量:4113.64

其结构如下:

司美格鲁肽是由诺和诺德公司研制开发的新一代长效GLP-1类似物,用于治疗II型糖尿病，司美格鲁肽除降底血糖之外还有减肥和保护心血管的功效，是目前GLP-1药物中降糖及减肥效果最好的一个药。FDA在2017年批准注射剂型上市，2019年9月20号批准口服剂型上市。

司美格鲁肽为GLP-1类似物,与人GLP-1有94％同源性。司美格鲁肽的长效机制是基于对结构的修饰，司美格鲁肽在第8位修改为α-氨基异丁酸,用来增加稳定作用，避免被DPP-4酶降解。此外，通过结构修饰，把肽链第26位的赖氨酸位置连接上18碳脂肪二酸侧链，相比C16的利拉鲁肽，增长的碳链对白蛋白的亲和力增强5～6倍，与白蛋白结合，增大了本品的分子量，避免快速被肾脏清除并防止代谢性降解,延长体内半衰期。并把34位的赖氨酸替换成精氨酸，以确保26位C18侧链的稳定性。因此，本品半衰期长达1周,司美格鲁肽为GLP-1受体激动剂，结合且激活GLP-1受体，通过介导GLP-1受体，以葡萄糖依赖的方式，刺激胰岛素分泌，并降低胰高血糖素分泌。此外，血糖降低也与餐后初始阶段延迟胃排空有关。

目前出现了较多关于多肽纯化的公开技术，如CN201711474148公开了一种纯化司美格鲁肽的方法、CN201811482820公开了一种司美格鲁肽纯化专用填料及其纯化方法、CN201911201916公开了一种司美格鲁肽的分离纯化方法、CN201810663478公开了一种纯化司美格鲁肽的方法。现有纯化方法存在粗肽样品溶解方法不稳定、对特定杂质去除不明显，纯化收率过低等问题。

发明内容

本发明针对司美格鲁肽的理化特征，提供了一种操作性强、工艺简单而稳定、收率高的司美格鲁肽纯化工艺。

为实现上述目的本发明采取以下技术方案：

一种司美格鲁肽的纯化方法，其包括如下步骤：

1)获得固相合成方法裂解树脂以及脱除保护基的司美格鲁粗肽，用含有机溶剂的磷酸盐缓冲溶液溶解司美格鲁肽粗肽；

2)取司美格鲁肽粗肽溶液用0.22μm有机滤膜过滤，收集滤液备用；

3)第一步纯化以反相填料为固定相，用含有机溶剂的缓冲盐溶液为A相，乙腈为B相，进行梯度洗脱，收集纯度大于95％，单杂小于0.8％的组分浓缩；

4)第二步纯化以反相填料为固定相，稀醋酸溶液为A相，乙腈为B相，进行梯度洗脱，收集纯度大于99.5％，单杂小于0.1％的组分；