[发明专利]幽门螺旋杆菌检测用核酸适配体与筛选检测方法及用途

说明书

本发明公开了一种用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列如HPA‑2中所示。本发明还公开了该幽门螺旋杆菌特异性检测的筛选方法及检测方法与用途。检测方法以核酸适配体修饰的淬灭基团作为识别探针，以核酸适配体互补链修饰的荧光作为荧光探针，幽门螺旋杆菌的检测是通过核酸适配体探针的荧光变化来实现的。本发明核酸适配体含有80个碱基和特殊的二级结构，其对幽门螺旋杆菌菌体表面蛋白的亲和力达到19.3±3.2nM。该核酸适配体针对幽门螺旋杆菌具有高特异性的特点，可用于对幽门螺旋杆菌的快速检测。

技术领域

本发明属病原微生物检测技术领域，具体涉及一种可用于特异性检测幽门螺旋杆菌的核酸适配体，本发明还涉及用核酸适配体检测幽门螺旋杆菌的方法与用途。

背景技术

大量研究表明，超过90%的十二指肠溃疡和80%的胃溃疡是由幽门螺旋杆菌感染引起的，可引起胃粘膜轻度慢性炎症，甚至胃、十二指肠溃疡、胃癌。自1983年胃镜活检标本成功分离培养以来，细菌学、基因组学、同位素示踪、病理学、血清学、分子生物学等多种诊断幽门螺杆菌感染的方法不断发展。但一般从标本采集的角度来看，可分为两类：侵入性和非侵入性。侵入性方法主要是指通过胃镜进行活检标本检查的方法，是目前消化疾病学科的一种常规方法，包括细菌的分离培养、直接涂片、快速脲酶试验、药敏试验等；非侵入性方法主要是指不用胃镜取活检标本诊断幽门螺旋杆菌感染的方法，包括抗体检测、抗原检测、尿素13C/14C呼气试验等。虽然这些方法对幽门螺杆菌的检测是有效的，但大多数都需要复杂的仪器和专业的操作人员，极大地限制了早期检测和预防健康造成的致命后果和经济损失。因此，开发一种简单、快速、高度特异性和实用的检测幽门螺杆菌的方法至关重要。

核酸适配体是通过体外筛选技术筛选的单链功能化核酸，SELEX是适配体的指数富集系统进化。其典型的三维结构和靶标特异性使其成为一种潜在的新型分子受体。与抗体相比，适配体具有分子量小、不具有免疫原性、稳定性好、易于合成、靶点广泛、特异性高、亲和力强等优点。基于这些优异的特性，适配体已成为免疫诊断、药理学、生物传感器、纳米材料等诸多领域的研究热点。特别是新型核酸药物的出现，使人们逐渐摆脱了传统药物的毒副作用，为人类诊断和治疗癌症等疾病提供了新的研究平台。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种新的用于幽门螺旋杆菌快速检测的ssDNA核酸适配体。

本发明的又一目的是提供用所述核酸适配体进行检测幽门螺旋杆菌的方法，用于幽门螺旋杆菌快速检测。

本发明的再一目的是提供上述单链DNA核酸适配体的筛选方法与用途。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

本发明公开了一种用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列如HPA-2中所示：

HPA-2：5’-AAGGAGCAGCGTGGAGGTTACCAGGAGGACCCTATTCTCG

TGTATCGACGAGATCCAGTGACCACGACGACACACCCTAA-3’。

本发明所述的所述的用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，进一步优选的技术方案是：对核酸适配体进行突变或改造，使其能用于幽门螺旋杆菌的检测。

本发明所述的所述的用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，进一步优选的技术方案是：所述的突变或改造方法选自：改造、磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、同位素化修饰；或者添加生物素、地高辛、荧光物质、淬灭基团、纳米材料、聚乙二醇、肽段、蛋白、叶酸或酶标记以用于幽门螺旋杆菌的检测。

本发明所述的所述的用于幽门螺旋杆菌特异性检测的单链DNA核酸适配体，进一步优选的技术方案：荧光标记的核酸适配体互补链长度在10%-25%之间。