[发明专利]一种耳聋基因检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种耳聋基因检测方法，包括以下步骤：S1：提取待测样本的基因组DNA；S2：PCR扩增杂交产物：采用不对称PCR扩增，先预混合反应体系中除下游引物以外的所有成份，最后在暗室中加入下游引物，混匀后置于PCR仪进行扩增，反应总体系为25μL，其中10×PCR缓冲液2.5μL，2.5mmol/LdNTP3.0μL，10μm/L的荧光标记下游引物4.0μL，10μm/L的上游引物1.0μL，DNA模板2.0μL，ExTaqTM酶0.25μL，灭菌水12.25μL，PCR扩增反应条件：94‑95℃变性5min，94‑95℃变性1min，58~60℃变性30s，70~72℃变性1min，共30~35个循环，最后70~72℃延伸10~12 min；S3：PCR产物与基因芯片杂交；S4：基因芯片的结果分析；所述基因芯片含有耳聋突变基因的特异性探针；所述耳聋为药物性耳聋或遗传性耳聋。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种耳聋基因检测方法及其应用。

背景技术

耳聋是中国第一大残疾，其中遗传因素所致的耳聋约占60％。遗传性耳聋主要是指基因异常所致的耳聋，是人类最常见的感觉神经系统缺陷。这种疾病通过常染色体隐性，常染色体显性，X-连锁遗传和线粒体遗传方式遗传给下一代。

现有技术研究表明：中国聋人常见耳聋突变的发生频率，确定了GJB2、SLC 26A4、线粒体基因(A1555G和C 1494T突变)是导致中国大部分遗传性耳聋发生的3个最为常见的基因，对以上基因进行检测可以诊断近60％的遗传性耳聋，为在我国进行耳聋基因诊断奠定了坚实的理论基础。其中，GJB2在遗传性非综合征型耳聋(NSHI)中所占比例相对较高，占所有NSHI 50％左右，235deIC则是东亚人群发病率最高的突变；SLC26A4基因突变以IVS7-2A＞G为最常见；线粒体突变所致耳聋亦较常见，约占语前聋的5％，且绝大部分系1555A＞G突变。

目前基于遗传性耳聋基因筛查的试剂盒有多种方法，且随着分子遗传学技术的快速发展和基因芯片技术的广泛应用，耳聋芯片成为NSHL基因诊断的主要检测方法。通过对基因的识别可以预防先天性耳聋出生缺陷，控制药物致聋风险，预防或者延缓耳聋的发生发展。但目前运用基因芯片技术对耳聋基因进行检测时，PCR扩增过程中往往容易出现非特异性扩增，引起检测结果的假阳性，容易对后期的基因芯片杂交过程产生影响，影响了该检测技术的检测准确性。

发明内容

本发明旨在克服上述现有技术的至少一种缺陷，提供一种耳聋基因检测方法及其应用，以达到准确性和灵敏度高的目的。

本发明采取的技术方案是，提供一种耳聋基因检测方法，包括以下步骤：S1：提取待测样本的基因组DNA；S2：PCR扩增杂交产物：采用不对称PCR扩增，先预混合反应体系中除下游引物以外的所有成份，最后在暗室中加入下游引物，混匀后置于PCR仪进行扩增，反应总体系为25μL，其中10×PCR缓冲液2.5μL，2.5mmol/LdNTP3.0μL，10μm/L的荧光标记下游引物4.0μL，10μm/L的上游引物1.0μL，DNA模板2.0μL，ExTaqTM酶0.25μL，灭菌水12.25μL，PCR扩增反应条件：94-95℃变性5min，94-95℃变性1min，58～60℃变性30s，70～72℃变性1min，共30～35个循环，最后70～72℃延伸10～12min；S3：PCR产物与基因芯片杂交；S4：基因芯片的结果分析；所述基因芯片含有耳聋突变基因的特异性探针；所述耳聋为药物性耳聋或遗传性耳聋。