[发明专利]UPLC法同时检测柱花草中4种次级代谢物的方法

权利要求书

1.一种柱花草4种次级代谢物的检测方法，其特征在于，包括：

所述次级代谢物为水杨酸、原苯甲酸三乙酯、吲唑和大豆甾醇B；

柱花草经提取获得待测液，以超高效液相色谱法对待测液进行检测，色谱参数为：

C18色谱柱，检测器为二极管阵列检测器，检测波长210nm和240nm；

流动相A：20mmol/L乙酸铵水溶液，流动相B：甲醇；

梯度洗脱程序：

0～5.00min，流动相B的体积分数为40％；

5.00～5.01min，流动相B的体积分数由40％至98％；

5.01～6.00min，流动相B的体积分数为98％；

6.00～6.01min，流动相B的体积分数由98％至40％；

6.01～8.00min，流动相B的体积分数为40％；

水杨酸、原苯甲酸三乙酯和吲唑的检测波长为240nm，大豆甾醇B的检测波长为210nm。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，柱花草待测液的制备方法为：

柱花草与乙酸乙酯混合，经超声提取获得的提取液；

所述提取液以C18吸附剂处理后，取上清液经浓缩干燥后复溶，获得柱花草提取液，所述复溶的溶液由40％流动相B和60％流动相A组成。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，

每g柱花草与8mL～12mL乙酸乙酯混合；

每g柱花草提取物以3g C18吸附剂处理；

每g柱花草的提取物以1mL溶液，于10±2℃，超声复溶1min。

4.根据权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于，所述超声提取的功率为90W，次数为2次，每次25min，第一次超声提取结束后，分离上清液；沉淀再次加入等体积乙酸乙酯进行第二次超声提取，合并两次提取的上清液为提取液。

5.根据权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于，所述C18吸附剂处理包括将提取液与C18吸附剂，涡旋混合10min后，于9000r/min下离心5min，取上清液。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的尺寸为2.1mm×100mm,1.6μm；所述色谱柱的柱温35℃；所述流动相的流速为0.3mL/min。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测为根据获得色谱图的出峰时间对次级代谢物进行定性；

检测波长为240nm获得的色谱图中，出峰时间为1.030±0.2min为水杨酸，出峰时间为2.304±0.2min为原苯甲酸三乙酯，出峰时间为3.074±0.2min为吲唑；

检测波长为210nm获得的色谱图中，出峰时间为6.607±0.2min为大豆甾醇B。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测为根据获得色谱图的峰面积对次级代谢物进行定量；

水杨酸的回归方程为Y＝8.87×10³X-3.10×10³；

原苯甲酸三乙酯的回归方程为Y＝1.35×10⁴X-5.18×10³；

吲唑的回归方程为Y＝7.69×10³X-1.67×10³；

大豆甾醇B的回归方程为Y＝2.36×10³X-1.57×10⁴。