[发明专利]生物样品中菌体的分离、质谱鉴定及药物敏感性检测方法有效
申请号: | 202011047451.2 | 申请日: | 2020-09-29 |
公开(公告)号: | CN112345619B | 公开(公告)日: | 2022-04-29 |
发明(设计)人: | 洪维礼;蓝璐;王璞;孙波 | 申请(专利权)人: | 北京航空航天大学 |
主分类号: | G01N27/62 | 分类号: | G01N27/62;G01N1/28;C12M1/36;C12M1/10;C12M1/00;C12Q1/24 |
代理公司: | 北京华进京联知识产权代理有限公司 11606 | 代理人: | 彭辉 |
地址: | 100089*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 生物 样品 菌体 分离 鉴定 药物 敏感性 检测 方法 | ||
1.一种生物样品中菌体的分离方法,其特征在于,采用微流控系统,所述微流控系统包括:
微流控芯片,所述微流控芯片设置有多个工作区,每个所述工作区开设有:加样室、反应室、样品收集室、虹吸阀以及废液室;所述加样室、所述反应室、所述样品收集室和所述废液室沿径向依次间隔设置,所述反应室分别与所述加样室和所述样品收集室连通,所述反应室通过所述虹吸阀与所述废液室连通,使得所述微流控芯片在进行离心操作时,所述加样室内的液态样品可沿径向依次流入所述反应室和所述样品收集室,所述反应室内的废液可以通过所述虹吸阀吸入至所述废液室;
加样装置,用于将液态样品加入所述加样室内,所述液态样品包括生物样品或重悬液;
旋转伸缩装置,与所述加样装置固定连接;
控制装置,分别与所述加样装置和所述旋转伸缩装置电连接,用于通过所述旋转伸缩装置控制所述加样装置沿所述旋转伸缩装置的轴向做旋转和伸缩运动,以使所述加样装置将所述液态样品加入所述微流控芯片内,还用于控制所述加样装置加入所述微流控芯片内的加样量;
所述分离方法包括以下步骤:
a、通过所述加样装置将生物样品加入所述微流控芯片中的加样室,将所述微流控芯片静置第一预设时间后,控制转动装置按照第一转速带动所述微流控芯片进行离心旋转,所述第一转速的设定使得所述加样室中的液体进入废液室,沉淀留在样品收集室或者反应室,所述生物样品中含有细菌和真菌中的至少一种;
b、将所述微流控芯片离心旋转后控制所述转动装置停止,通过所述加样装置将重悬液加入所述加样室,并控制所述转动装置按照第二转速带动所述微流控芯片进行正反交替离心旋转,使得加样室内的所述重悬液流入反应室中,所述第二转速的设定使得所述反应室和所述样品收集室中的样品混合,所述混合包括沉淀和液体的混合,将所述微流控芯片进行正反交替离心旋转后,控制所述转动装置按照所述第一转速带动所述微流控芯片进行离心旋转,所述第二转速小于所述第一转速。
2.根据权利要求1所述的生物样品中菌体的分离方法,其特征在于,所述生物样品选自唾液、血液、血清、血浆、组织裂解液、羊水、绒毛、阴道分泌物、粪便、脑脊液或尿液。
3.根据权利要求1所述的生物样品中菌体的分离方法,其特征在于,所述第一转速为270 ×g~1470 ×g,所述第二转速为27 ×g ~147 ×g。
4.根据权利要求1所述的生物样品中菌体的分离方法,其特征在于,步骤b中以第二转速进行正反交替离心中首次离心的方向与步骤a中的离心方向相同,步骤b以第一转速进行离心的方向与步骤a中的离心方向相同。
5.根据权利要求4所述的生物样品中菌体的分离方法,其特征在于,第一转速为270 ×g ~1470 ×g,第二转速为27 ×g ~147 ×g,步骤a中,第一预设时间为20s~40s,第一转速的离心时间为250s~350s;步骤b中,第二转速正向和反向离心单次时间分别为5s~10s,正反交替离心总次数为8~10次,第一转速的离心时间为250s~350s。
6.根据权利要求1~5任一项所述的生物样品中菌体的分离方法,其特征在于,所述加样装置包括:
加样控制台,与所述控制装置电连接;
注射主体,设置于所述加样控制台;以及
注射头,与所述注射主体连通,所述控制装置通过所述加样控制台控制所述注射主体将所述液体沿所述注射头加入所述微流控芯片内的加样量。
7.根据权利要求1~5任一项所述的生物样品中菌体的分离方法,其特征在于,所述旋转伸缩装置包括:
旋转台,与所述控制装置电连接;以及
伸缩臂,所述伸缩臂的一端固定于所述旋转台,所述伸缩臂远离所述旋转台的一端与所述加样装置固定连接。
8.根据权利要求1~5任一项所述的生物样品中菌体的分离方法,其特征在于,所述反应室沿所述微流控芯片的径向截面形状为漏斗形。
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