[发明专利]一种用于检测泛素-蛋白酶体系统降解活性的生物探针

权利要求书

1.一种用于检测泛素-蛋白酶体系统降解活性的生物探针，其特征在于，所述生物探针的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的用于检测泛素-蛋白酶体系统降解活性的生物探针，其特征在于，所述生物探针的编码序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种检测泛素-蛋白酶体系统降解活性的试剂盒，其特征在于，包括：包含核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的生物探针编码序列的重组质粒。

4.如权利要求3所述的检测泛素-蛋白酶体系统降解活性的试剂盒，其特征在于，原始载体采用PCDNA3.1质粒。

5.如权利要求1或2所述的生物探针在制备检测泛素磷酸化的试剂盒中的应用。

6.如权利要求1或2所述的生物探针在筛选泛素激酶抑制剂或激活剂中的应用。

7.如权利要求1或2所述的生物探针在制备检测泛素依赖的蛋白酶体活性的试剂盒中的应用。

8.一种筛选泛素-蛋白酶体系统活性抑制剂或激活剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的DNA片段克隆到PCDNA3.1质粒中得到重组质粒；

(2)通过转染将重组质粒导入HEK293细胞中，使细胞表达生物探针Ub-cpEGFP；

(3)筛选抑制剂时，往转染细胞中加入待测化合物，作用3～24h后，收集细胞，检测生物探针的荧光强度，与对照相比，如荧光强度增强，表明待测化合物抑制泛素-蛋白酶体系统活性；

筛选激活剂时，往转染细胞中加入已知的抑制剂以提高荧光本底，或者共转染表达泛素激酶的重组质粒，增强泛素激酶的作用，提高荧光本底，再加入待测化合物，作用3～24h后，收集细胞，检测生物探针的荧光强度，与对照相比，如荧光强度减弱，表明待测化合物激活泛素-蛋白酶体系统活性。