[发明专利]一种嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料及其制备方法

权利要求书

1.一种嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S100，在ED的介导作用下，使HA与ADH进行交联反应，制得HA水凝胶；

步骤S200，采用液氮梯度冷冻法，将HA水凝胶塑形成具有纵向多通道结构的HA水凝胶支架；

步骤S300，采用NaIO4氧化法，将antiNgR连接到具有纵向通道结构的HA支架上，得到接枝antiNgR的HA水凝胶支架；

步骤S400，将接枝antiNgR的HA水凝胶支架置于培养孔板内，调节其PH值至7左右，灭菌后，加入含胎牛血清的DMEM/F-12培养基，浸润24小时后，在培养基内接种经分离、培养得到的嗅鞘细胞，每隔一天更换一次培养基，培养5-7天后，制得嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料。

2.根据权利要求1所述的嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料的制备方法，其特征在于，步骤S100具体包括，

(1)称取0.04g PLL，加入去离子水溶解，并调节其pH值至11左右；

(2)在PLL溶液中缓慢加入0.2g透明质酸钠，充分搅拌至充分溶解后,加入1.4g ADH，搅拌24h，调节该混合溶液的pH值至4.7左右，得到中间混合液；

(3)将0.4g EDC先用去离子水溶解后，再逐滴加入上述得到的中间混合液中，充分搅拌至溶液渐成凝胶；

(4)将上述凝胶用去离子水在超声波清洗器中清洗，清洗后，调节pH值至7，并置于零下80℃冰箱内预冻2h后置入冷冻真空干燥仪内冻干，得到HA水凝胶；

(5)将冻干的HA水凝胶材料置于真空干燥器中备用。

3.根据权利要求1所述的嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料的制备方法，其特征在于，步骤S200具体包括，

(1)将数个塑料吸管捆扎成一体，塑料吸管的下端采用保鲜膜封口，得到塑形模具；

(2)将HA水凝胶注入塑形模具内，塑形模具周围用聚苯乙烯泡沫塑料严密环绕包裹，除去塑形模具下端的保鲜膜，使塑形模具中的HA水凝胶上下端暴露；

(3)将注有HA水凝胶的塑形模具放入盛有液氮的保温壶中，进行梯度冷冻30min；

(4)将注有HA水凝胶的塑形模具从保温壶中取出，转至冷冻真空干燥仪中进行干燥，干燥后，得到具有纵向多通道结构的HA水凝胶支架，将其放入真空干燥器中备用。

4.根据权利要求1所述的嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料的制备方法，其特征在于，步骤S300，具体包括，

(1)取5mg antiNgR溶于10ml去离子水中，加入100mg NaIO4，轻微搅拌至充分溶解；

(2)将上述混合液倒入透析袋中透析8-10h，每2h更换去离子水1次，除去未反应的NaIO4及其反应残留物，用滤菌器过滤，得到无菌的抗体溶液；

(3)对制备得到的具有纵向多通道结构的HA水凝胶支架进行消毒灭菌，然后将其与无菌的抗体溶液混合，在超净工作台中反应24h，得到接枝antiNgR的HA水凝胶支架。