[发明专利]一种嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料及其制备方法

说明书

本申请公开了一种嗅鞘细胞‑透明质酸水凝胶复合材料及其制备方法，用于制备嗅鞘细胞‑透明质酸水凝胶复合材料，该嗅鞘细胞‑透明质酸水凝胶复合材料可应用于脊髓损伤组织的修复，且具有良好的修复效果。与传统的嗅鞘细胞相比，本申请的嗅鞘细胞‑透明质酸水凝胶复合材料能够有效地提高嗅鞘细胞的存活率，还能填补脊髓组织缺损并与周边组织整合，抑制炎症反应和胶质瘢痕形成，诱导神经纤维再生，能够一定程度地促进脊髓损伤后运动功能的恢复。

技术领域

本申请涉及组织工程技术领域，尤其涉及一种嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料及其制备方法。

背景技术

脊髓损伤是主要因外伤所致的疾患，常导致脊髓局部大量神经细胞死亡、纤维束断裂，造成患者损伤平面以下不同程度的感觉、运动及内脏功能障碍。

针对脊髓损伤处神经纤维再生、通路重建及功能恢复，目前常用一种治疗方式是植入已经分化好的胶质细胞，例如嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells，OECs)，从而有利于神经的再生。嗅鞘细胞具有长突起，可修复原有损伤的神经元轴突，同时能分泌多种神经营养因子(如NGF、BDNF、GDNF)，可以为轴突再生提供适宜微环境，有利于神经的再生，改善脊髓损伤后的神经功能。

目前，采用OECs治疗损伤脊髓，多数采用将嗅鞘细胞注射移植至机体损伤脊髓处的模式，但是，在实际的治疗过程中，脊髓损伤存在较大的组织坏死囊腔，使得植入的OECs缺乏细胞外基质支持以及缺乏血供和必要的生存微环境，因此，移植至损伤脊髓处的OECs在损伤区大量死亡，导致OECs对损伤脊髓治疗的效果欠佳，对轴突再生促进作用较小，对髓鞘形成及机体运动功能恢复也不明显。

发明内容

本申请提供了一种嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料及其制备方法，以解决现有的嗅鞘细胞在实际移植治疗过程中，存活率较低，对损伤脊髓的治疗效果欠佳的问题。

本申请提供一种嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料的制备方法，包括以下步骤：

步骤S100，在ED的介导作用下，使HA与ADH进行交联反应，制得HA水凝胶；

步骤S200，采用液氮梯度冷冻法，将HA水凝胶塑形成具有纵向多通道结构的HA水凝胶支架；

步骤S300，采用NaIO4氧化法，将antiNgR连接到具有纵向通道结构的HA支架上，得到接枝antiNgR的HA水凝胶支架；

步骤S400，将接枝antiNgR的HA水凝胶支架置于培养孔板内，调节其PH值至7左右，灭菌后，加入含胎牛血清的DMEM/F-12培养基，浸润24小时后，在培养基内接种经分离、培养得到的嗅鞘细胞，每隔一天更换一次培养基，培养5-7天后，制得嗅鞘细胞-透明质酸水凝胶复合材料。

可选地，步骤S100具体包括，

(1)称取0.04g PLL，加入去离子水溶解，并调节其pH值至11左右；

(2)在PLL溶液中缓慢加入0.2g透明质酸钠，充分搅拌至充分溶解后,加入1.4gADH，搅拌24h，调节该混合溶液的pH值至4.7左右，得到中间混合液；

(3)将0.4g EDC先用去离子水溶解后，再逐滴加入上述得到的中间混合液中，充分搅拌至溶液渐成凝胶；

(4)将上述凝胶用去离子水在超声波清洗器中清洗，清洗后，调节pH值至7，并置于零下80℃冰箱内预冻2h后置入冷冻真空干燥仪内冻干，得到HA水凝胶；

(5)将冻干的HA水凝胶材料置于真空干燥器中备用。

可选地，步骤S200具体包括，

(1)将数个塑料吸管捆扎成一体，塑料吸管的下端采用保鲜膜封口，得到塑形模具；