[发明专利]一种AACT基因过表达试剂及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种AACT基因过表达试剂及其制备方法，所述方法包括如下：步骤：1）.以人cDNA文库为模板，设计带有EcoR I和Xba I酶切位点的引物，在启动子ATG前增加增强子序列GCCACC，PCR扩增得到产物编码区序列的AACT；2）.将pCS2‑HA空载体用EcoR I和Xba I进行双酶切得到线性化pCS2‑HA载体；3）.将步骤1）得到的所述目的基因AACT与步骤2）得到的所述线性化pCS2‑HA载体进行连接形成过表达载体pCS2‑HA‑AACT。本发明还提供了所述AACT基因过表达试剂在抑制肺癌细胞增殖方面的应用。本发明的整个构建过表达载体的过程成本低、环保、操作简便、效率高，提供的AACT基因过表达试剂能够帮助对肺癌进行更早诊断，灵敏度高、可靠性强。

技术领域

本发明涉及肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种AACT基因过表达试剂及其制备方法和应用。

背景技术

肺癌是原发性恶性肿瘤，发病率和死亡率日益增加，位居第一，成为威胁人类健康的一大恶性肿瘤。肺癌可分为小细胞肺癌(Small cell lung cancer，SCLC)和非小细胞肺癌(Non- small cell lung cancer，NSCLC)，SCLC更加恶性，易转移，生存时间很短，晚期患者五年生存率约10-15%。而NSCLC发生发展比较缓慢，并且转移比较晚，临床病理中80%-85%的患者都为NSCLC，NSCLC主要包括腺癌(Adenocarcinoma, AD)、鳞状细胞癌(Squamous-cell carcinoma, SCC)和大细胞癌(Large cell carcinoma, LCC)三种组织亚型。近年来在肺癌的诊断与治疗上有了很多新的突破，尤其是NSCLC晚期患者的治疗已有诸多方案。然而，早期肺癌患者常常无明显的临床症状，临床早诊技术水平低、缺乏特异性诊断标志物，容易造成错诊和漏诊，早诊率仅10%-20%；70%的NSCLC患者诊断时已局部晚期或转移期，失去了最佳治疗时机，长期疗效仍相对较差，5年生存率仅为19.7%。未能及早发现肺癌使得有效治疗变得困难，是导致当前NSCLC患者高死亡率的主要原因。若能早期发现非小细胞肺癌，尤其是在免疫缺陷期，5年生存率可达85%以上。

临床上较常见的肺癌筛查手段是低剂量螺旋CT（Low-dose computertomography, LDCT）和血清肿瘤标志物检查。LDCT辐射小，是标准CT辐射剂量的22%，相对安全，将肺癌患者死亡率降低了20%，但LDCT特异性低，假阳性率高达96%，易误诊，很小病灶可能发现不了。常见的肺癌血清标志物有癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen, CEA）、细胞角蛋白片段19（Cytokeratin 19 fragment, CYFRA21-1）和鳞状细胞癌抗原（Squamouscell carcinoma antigen, SCCA）等。① CEA是广谱的肿瘤标志物，30%~70%肿瘤患者血清中CEA水平升高。肺癌分期越高，CEA浓度越高，但CEA对晚期患者诊断较明显，早诊效果较差。② CYFRA21-1是诊断肺鳞癌相对较好的标志物，灵敏度为40%-60%。③ SCCA检测肺鳞癌的灵敏度为15%-55%。虽然现有这些指标联合诊断效果优于单一指标，但总的来说，现有的肺癌早诊技术水平低，发现晚，缺乏高灵敏度和高特异性早诊标志物，达不到早发现、早诊断的要求，在早期筛查应用中有一定的局限性。此外，肺癌早期诊断的瓶颈是良恶性肿瘤难以区分，约30%不确定的肺部疾病患者经手术切除后组织活检为良性疾病，而手术会增加感染等风险。因此，迫切需要寻找高效灵敏的血清肿瘤生物标志物，以提高早期非小细胞肺癌患者的生存率，这一点具有重要意义。

总的来说，如上所述，现有的肺癌早诊技术水平低，发现晚，缺乏高灵敏度和高特异性早诊标志物，达不到早发现、早诊断的要求，在早期筛查应用中有一定的局限性。