[发明专利]一种定量检测肺炎球菌多糖含量的免疫学检测方法

说明书

本发明公开了一种定量检测肺炎球菌多糖含量的免疫学检测方法。包括如下步骤：(1)配置双光径免疫浊度分析仪的冲洗液；双光径免疫浊度分析仪的冲洗液由包括3‑环己胺‑2‑羟基丙磺酸配置而成；(2)采用冲洗液冲洗双光径免疫浊度分析仪，然后用其测定至少4个不同浓度的肺炎球菌多糖标准品溶液的吸光度；以肺炎球菌多糖标准品溶液的吸光度、浓度，建立肺炎球菌多糖标准品溶液的标准曲线；(3)在步骤(2)相同的条件下，测定待测样品溶液的吸光度；采用步骤(2)中标准曲线计算，得到待测样品溶液中肺炎球菌多糖的浓度，以得到待测样品中肺炎球菌多糖的含量。本发明克服了普通化学检测方法无法准确区分各型肺炎球菌多糖的困难，同时降低试验成本。

技术领域

本发明涉及一种定量检测肺炎球菌多糖含量的免疫学检测方法，属于药物分析领域。

背景技术

肺炎链球菌在呼吸道的感染可引起支气管炎、肺炎、中耳炎、鼻窦炎等疾病，如果肺炎链球菌侵入血液则会引起脑膜炎、败血症等更为严重的疾病。肺炎链球菌始终是导致儿童脑膜炎、菌血症、肺炎等严重疾病的首位病原菌，是引起鼻窦炎和急性中耳炎的最常见病因。迄今为止，23个血清型的肺炎链球菌多糖疫苗已经研制成功，在23价肺炎球菌多糖疫苗成品指控项目中，23价肺炎球菌多糖含量是疫苗的重要检测指标。

速率散射浊度法(LSR)则是测定各型肺炎多糖含量的主要方法。因为利用了抗原抗体的特异性反应，所以可以准确地检測23价肺炎多精疫苗中各型多糖的含量。不同于普通化学检测方法无法准确区分各型肺炎球菌多糖，该方法更为精确，并有较高的灵敏度。

发明内容

本发明的目的是提供一种定量检测肺炎球菌多糖含量的免疫学检测方法。

本发明提供的一种定量检测肺炎球菌多糖含量的免疫学检测方法，包括如下步骤：

(1)配置双光径免疫浊度分析仪的冲洗液；

所述双光径免疫浊度分析仪的冲洗液由包括3-环己胺-2-羟基丙磺酸(CAPSO)配置而成；

(2)采用所述冲洗液冲洗双光径免疫浊度分析仪，然后用其测定至少4个不同浓度的所述肺炎球菌多糖标准品溶液的吸光度，检测时所述肺炎球菌多糖标准品溶液放置在样本区、血清加入UDR试剂盒后放在试剂区；以所述吸光度为纵坐标，以所述肺炎球菌多糖标准品溶液的浓度为横坐标，建立所述肺炎球菌多糖标准品溶液的标准曲线；

(3)在步骤(2)相同的条件下，测定待测样品溶液的吸光度，检测时所述待测样品溶液放置在样本区、血清加入UDR试剂盒后放在试剂区；采用步骤(2)中所述标准曲线计算，得到所述待测样品溶液中肺炎球菌多糖的浓度，以得到待测样品中肺炎球菌多糖的含量。

本发明中，所用肺炎球菌多糖标准品可购自丹麦国立血清研究所。

上述的方法中，所述双光径免疫浊度分析仪的型号为IMMAGE 800；

所述冲洗液由包括NaCl、所述3-环己胺-2-羟基丙磺酸(CAPSO)和NaoH配置而成。进一步的，根据所述冲洗液使用限期，还可以加入防腐剂。具体的，所述实验所用洗液为现用现配，无需加防腐剂。

上述的方法中，配制的1000ml所述冲洗液中，所述NaCl的用量为4～5g；所述3-环己胺-2-羟基丙磺酸的用量为2～3g，所述NaoH的含量调pH值为8.0～10.5，具体可为10.2。

上述的方法中，步骤(2)和(3)中测定吸光度采用的波长为530～670nm，具体可为670nm，90度检测角。

上述的方法中，步骤(2)和(3)中测定吸光度采用的检测模式为速率散射模式。

上述的方法中，步骤(2)和(3)中测定吸光度采用的光源为激光光源。