[发明专利]一种通过探针捕获富集核酸的方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的基因检测方法，其特征在于，其特征在于，具体包括以下步骤：

1）吸取1 ml咽拭子/鼻拭子样本加入到已装有0.2 mg玻璃珠的EP管中，用旋转混匀仪2000-3000转振荡5 min；

2）取200 μg特异性的新冠病毒核酸捕获探针组合加入到一个干净的无核酸酶的离心管中，加入100 µl Buffer I振荡混匀磁珠，置于磁力架上磁分离30 s，弃除上清，备用；所述特异性的新冠病毒核酸捕获探针组合包括磁珠和特异性寡核苷酸序列，所述特异性寡核苷酸序列与磁珠相连，所述特异性寡核苷酸序列能够与靶核酸通过碱基互补原理产生特异性结合，所述特异性寡核苷酸序列具体为以下序列中的一种或几种：

所述Buffer I包括：0.5 M NaCl, 20 mM PH值为7.5的Tris-HCl, 1 mM EDTA；

3）吸取步骤1）中的上清液加入到新的EP管中，然后向其中加入120μl10×Buffer I和新冠病毒RNA捕获磁珠，65℃加热5min后转移到42℃金属浴孵育10min，得到磁珠-探针-核酸复合体样本；

4）磁分离弃除上清，加入100 µl Buffer I，振荡混匀，磁分离弃除上清；

5）加入100 µl Buffer II，振荡混匀，磁分离弃除上清，所述Buffer II包括：0.15 MNaCl, 20 mM PH值为7.5的Tris-HCl, 1 mM EDTA；

6）取步骤5）中所得产物作为PCR扩增模板，采用PCR扩增技术进行基因检测；

采用所述方法能够检测出10²拷贝/ ML的样本。

2.根据权利要求1所述的非诊断目的的基因检测方法，其特征在于，在所述步骤5）之后包括以下步骤：

a）加入5 µl无核酸酶水，振荡混匀，65 ℃孵育2 min；

b）磁分离，吸取全部上清作为PCR扩增模板；

c）采用PCR扩增技术进行基因检测。

3.根据权利要求1或2所述的非诊断目的的基因检测方法，其特征在于，采用新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒通过荧光PCR法检测。

4.根据权利要求1所述的非诊断目的的基因检测方法，其特征在于，通过间接方式将特异性寡核苷酸序列交联到磁珠，所述间接方式包括链霉亲和素与生物素之间的相互结合作用、主客体配位作用、静电吸附作用中的一种或几种。

5.一种用于权利要求1所述的非诊断目的的基因检测方法的核酸富集试剂盒，其特征在于，包括特异性的新冠病毒核酸捕获探针组合，所述特异性的新冠病毒核酸捕获探针组合包括磁珠和特异性寡核苷酸序列，所述特异性寡核苷酸序列与磁珠相连，所述特异性寡核苷酸序列能够与靶核酸通过碱基互补原理产生特异性结合，所述特异性寡核苷酸序列具体为以下序列中的一种或几种：

。

6.根据权利要求5所述的核酸富集试剂盒，其特征在于，还包括Buffer I、Buffer II和10×Buffer I；所述Buffer I包括：0.5 M NaCl, 20 mM PH值为7.5的Tris-HCl, 1 mMEDTA，所述Buffer II包括：0.15 M NaCl, 20 mM PH值为7.5的Tris-HCl, 1 mM EDTA；所述10×BufferI包括5 M NaCl, 200 mM PH值为7.5的Tris-HCl, 10 mM EDTA。

7.根据权利要求5所述的核酸富集试剂盒，其特征在于，通过间接方式将特异性寡核苷酸序列交联到磁珠，所述间接方式包括链霉亲和素与生物素之间的相互结合作用、主客体配位作用、静电吸附作用中的一种或几种。

8.一种基因检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求5或6或7所述的核酸富集试剂盒。