[发明专利]PR3、MPO、GBM融合蛋白及其构建方法、应用

权利要求书

1.PR3、MPO、GBM融合蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No.5所示。

2.根据权利要求1所述的PR3、MPO、GBM融合蛋白，其特征在于，包括依次连接的PR3蛋白区段、MPO蛋白区段和GBM蛋白区段，PR3蛋白区段具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列表达，MPO蛋白区段具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列表达，GBM蛋白区段具有如SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列表达。

3.一种编码如权利要求1所述的PR3、MPO、GBM融合蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

4.PR3、MPO、GBM融合蛋白的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、重组全基因合成序列：依次连接PR3、MPO、GBM蛋白区段的核苷酸序列获得目的基因；

S2、构建重组质粒：将步骤S1中获得的重组全基因合成序列构建至表达载体，获得重组质粒；

S3、一次转染：将步骤S2中的重组质粒转染宿主细胞，获得重组杆粒；

S4、二次转染：将步骤S3中的重组杆粒再次转染宿主细胞，获得第一代的杆状病毒；

S5、表达：将步骤S4中的第一代的杆状病毒进行表达；

S6、获得融合蛋白：将步骤S5中表达得到的细胞培养物进行筛选、纯化，获得融合蛋白。

5.根据权利要求4所述的PR3、MPO、GBM融合蛋白的构建方法，其特征在于，所述步骤S1重组全基因合成序列过程中包含一个单位的PR3蛋白区段的核苷酸序列、一个单位的MPO蛋白区段的核苷酸序列和一个单位的GBM蛋白区段的核苷酸序列。

6.根据权利要求4所述的PR3、MPO、GBM融合蛋白的构建方法，其特征在于，所述步骤S1中重组全基因合成序列中还包括柔性肽基因序列、真核KOZAK序列、蜂毒信号肽序列和His标签序列。

7.根据权利要求4所述的PR3、MPO、GBM融合蛋白的构建方法，其特征在于，所述步骤S1重组全基因合成序列中，真核KOZAK序列、蜂毒信号肽序列、PR3蛋白区段的核苷酸序列、柔性肽基因序列、MPO蛋白区段的核苷酸序列、柔性肽基因序列、GBM蛋白区段的核苷酸序列和标签序列依次相连。

8.根据权利要求4所述的PR3、MPO、GBM融合蛋白的构建方法，其特征在于，所述步骤S2构建重组质粒中的表达载体包括昆虫细胞表达载体和/或杆状病毒表达载体。

9.根据权利要求4所述的PR3、MPO、GBM融合蛋白的构建方法，其特征在于，所述步骤S3一次转染时的宿主细胞包括大肠杆菌宿主和/或动物性细胞宿主。

10.如权利要求1-2任一所述的PR3、MPO、GBM融合蛋白在试剂盒、疫苗或诊断抗原中的应用。