[发明专利]监控大麦制麦过程稳定性的方法

权利要求书

1.监控麦芽制麦过程稳定性的方法，其特征在于，采用RT-PCR反转录和毛细管电泳技术联用通过监控麦芽萌发过程相关基因表达量，以监控麦芽在制麦过程中的稳定性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

筛选与麦芽水解酶相关的相关基因，并根据筛选得到的相关基因的序列设计多重引物；

提取获得麦芽细胞总RNA；

以麦芽细胞总RNA为模板，利用设计的多重引物对其进行mRNA反转录扩增，得到扩增产物；

利用毛细管电泳对上述扩增产物的表达量进行定量分析，并通过与标准工艺的基因表达图谱对比，判断麦芽在制麦过程中是否稳定。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述相关基因选自相关基因LD、AMY1、AMY4、GLU、ASP、CYS、SERⅠ、SERⅢ、MET、TRX、PDI、SEP、WRKY和内控基因ACT。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，根据上述相关基因设计的多重引物的上游引物依次为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ IDNO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ IDNO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14；

设计的多重引物的下游引物依次为SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17、SEQID NO.18、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23、SEQID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用液氮研磨破碎麦芽样品的细胞壁提取麦芽总RNA。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，利用设计的多重引物对其进行mRNA反转录扩增具体包括：

以纯化的麦芽细胞总RNA为模板，以根据相关基因设计的多重引物的下游引物为特异性引物合成cDNA第一链，反应体系为10μL；

以上述合成的cDNA第一链为模板，以根据13个相关基因设计的多重引物的上游引物为特异性引物，进行RT-PCR扩增反应。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，合成cDNA第一链的反应参数具体为：48℃、1分钟；42℃、60分钟；95℃、5分钟。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，RT-PCR扩增反应的参数具体为：95℃预变性、10分钟；94℃变性、30秒；退火温度56℃、30秒；71℃延伸、1分钟，循环35次。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，利用毛细管电泳对扩增产物的表达量进行定量分析具体为：

通过毛细管电泳获得每个基因的电泳峰，每个基因表达量＝基因峰高H/内控基因ACT峰高H_act。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，通过与标准工艺的基因表达图谱对比，判断麦芽在生产过程中是否稳定具体为：

对浸麦结束、发芽第一天、发芽第二天、发芽第三天、发芽第四天5个阶段的生产过程中的麦芽进行取样，标准工艺下，共获得13个相关基因在5个阶段的基因表达量，共计65个数据点；

采用同样的取样方式于新的生产工艺下进行取样，共获得13个基因在5个阶段的基因表达量，共计65个数据点；

利用主成分分析法PCA，将两组数据进行降维处理，获得两组数据的主成分得分；

如果两组数据的主成分得分差值≤0.5，则认为新的生产工艺的基因表达与标准工艺差别不大；

如果两组数据的主成分得分差值0.5，则认为新的生产工艺的基因表达与标准工艺差别较大。