[发明专利]监控大麦制麦过程稳定性的方法

说明书

本发明提出一种监控大麦制麦过程稳定性的方法，属于制麦技术领域，该方法采用RT‑PCR反转录和毛细管电泳技术联用通过监控大麦萌发过程相关基因表达量，以监控大麦在制麦过程中的稳定性。本发明提供的方法能够在制麦阶段准确评价大麦萌发的情况，对从源头把控大麦的品质具有指导意义。

技术领域

本发明属于制麦技术领域，尤其涉及一种监控大麦制麦过程稳定性的方法。

背景技术

啤酒中的各种组分来源于麦芽、酒花和酵母。麦芽的质量好坏直接影响着啤酒的质量。麦芽为酵母发酵提供糖、氨基酸等营养物质，同时增加啤酒醇厚柔滑的口感。麦芽对啤酒的生产、质量、成本、风味稳定起着举足轻重的作用。选择高品质的麦芽，成为啤酒生产企业的生产高质量啤酒的关键。

制麦过程是由原料大麦制成大麦的工艺过程，是啤酒生产的开始，也是对啤酒酿造工艺和成品类型及其质量有着决定性影响。在制麦过程中，大麦种子自身的蛋白、多糖等生物大分子会被逐步溶解，为大麦的萌发提供糖、氨基酸等营养物质。大麦品质的好坏本质是由于大麦发芽过程中溶解差异造成的，因而从源头把控大麦的品质具有重要意义。

发明内容

本发明提供了一种监控大麦制麦过程稳定性的方法，该方法能够在制麦阶段准确评价大麦萌发的情况，对从源头把控大麦的品质具有指导意义。

为了达到上述目的，本发明提供了一种监控大麦制麦过程稳定性的方法，其采用RT-PCR反转录和毛细管电泳技术联用通过监控麦芽萌发过程相关基因表达量，以监控麦芽在制麦过程中的稳定性。

作为优选，包括如下步骤：

筛选与麦芽水解酶相关的相关基因，并根据筛选得到的相关基因的序列设计多重引物；

提取获得麦芽细胞总RNA；

以麦芽细胞总RNA为模板，利用设计的多重引物对其进行mRNA反转录扩增，得到扩增产物；

利用毛细管电泳对上述扩增产物的表达量进行定量分析，并通过与标准工艺的基因表达图谱对比，判断麦芽在制麦过程中是否稳定。

作为优选，所述相关基因选自相关基因LD、AMY1、AMY4、GLU、ASP、CYS、SERⅠ、SERⅢ、MET、TRX、PDI、SEP、WRKY和内控基因ACT。可以理解的是，选择上述基因是因为其涉及大麦淀粉、蛋白水解相关功能，与制麦过程大麦的溶解密切相关，因而可以表征大麦在制麦过程萌发状态。

作为优选，根据上述相关基因设计的多重引物的上游引物依次为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQID NO.14；

设计的多重引物的下游引物依次为SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22、SEQ IDNO.23、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28。

作为优选，采用液氮研磨破碎麦芽样品的细胞壁提取麦芽总RNA。

作为优选，利用设计的多重引物对其进行mRNA反转录扩增具体包括：

以纯化的麦芽细胞总RNA为模板，以根据相关基因设计的多重引物的下游引物为特异性引物合成cDNA第一链，反应体系为10μL；