[发明专利]一种CA125蛋白、编码基因及其制备方法和应用在审
申请号: | 202011065277.4 | 申请日: | 2020-09-30 |
公开(公告)号: | CN112126650A | 公开(公告)日: | 2020-12-25 |
发明(设计)人: | 苑红霞;王彩虹;黄芳;徐智盼;李勇 | 申请(专利权)人: | 南京基蛋生物医药有限公司 |
主分类号: | C12N15/12 | 分类号: | C12N15/12;C12N15/85;C07K14/47;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;G01N33/96;G01N33/574;G01N33/68 |
代理公司: | 北京弘权知识产权代理事务所(普通合伙) 11363 | 代理人: | 逯长明;许伟群 |
地址: | 211505 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 ca125 蛋白 编码 基因 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种编码基因,其特征在于,所述编码基因包括如下(1’)至(3’)中的至少一种:
(1’)如SEQ ID No.2所示的DNA分子;
(2’)在严格条件下与(1’)所示DNA分子杂交,并且编码CA125蛋白的DNA分子,其中,所述CA125蛋白,其如下(1)或者(2)所示:(1)如SEQ ID No.1所示的蛋白;(2)将SEQ ID No.1所示的蛋白经过一个或者几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加并且具有相同功能的蛋白;
(3’)与(1’)或者(2’)所述氨基酸分子具有85%以上同一性,并且编码所述CA125蛋白的DNA分子。
2.含有权利要求1所述编码基因的重组质粒、转染细胞。
3.根据权利要求2所述的重组质粒,其特征在于,所述重组质粒由pcDNA3.1 Z(+)载体与权利要求1所述CA125编码基因融合而得,其中,所述pcDNA3.1 Z(+)载体由CMV启动子及6×His分泌信号肽编码基因构建而成。
4.根据权利要求2所述的转染细胞,其特征在于,所述转染细胞所用细胞载体为HEK293T细胞。
5.一种制备CA125蛋白的方法,其特征在于,所述方法包括:
步骤1,将第二方面所述编码基因克隆至pcDNA3.1Z(+)载体中构建分泌表达载体;
步骤2,利用所述分泌表达载体制备重组质粒;
步骤3,将步骤2获得的重组质粒转染至HEK293T细胞中;
步骤4,将步骤3获得的细胞进行培养,使其自诱导表达。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤2具体可以包括步骤2-1和步骤2-2:
步骤2-1,将步骤1获得的分泌表达载体转化至制备好的DH5α感受态细胞中,所述DH5α感受态细胞为由大肠杆菌DH5α菌株制备的感受态细胞;
步骤2-2,由步骤2-1制备的体系中挑取多组单克隆转化子,并对所挑取的间克隆转化子分别进行质粒抽提。
7.一种根据权利要求5或6所述方法制备的CA125蛋白。
8.一种检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒包括权利要求7所述CA125蛋白。
9.权利要求7所述CA125蛋白和/或权利要求1所述编码基因用于制备CA125蛋白标准品的应用。
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