[发明专利]一种CA125蛋白、编码基因及其制备方法和应用

说明书

本申请公开了一种CA125蛋白、其编码基因以及利用基因工程生产所述CA125蛋白的方法，所述方法通过基因克隆技术通过基因克隆技术将人CA125基因的胞外段部分序列克隆至哺乳动物细胞载体pcDNA3.1Z(+)载体中，C端融入可在HEK293T细胞中实现高效分泌表达的荧光素酶信号肽标签，并将该质粒转染HEK293T细胞，经抗性筛选获得CA125高表达、高活性细胞株，该细胞株能够分泌表达高活性且稳定性优良的CA125蛋白。

技术领域

本申请属于生物技术领域，特别涉及一种CA125蛋白、编码基因及其制备方法和应用。

背景技术

CA125蛋白是由黏蛋白l6(Mucin 16，MUCl6)编码基因编码的粘蛋白型糖蛋白，早期数据表明，CA125蛋白是一种分子量在200kd～2000kd之间的高分子糖蛋白，其包括一个短的细胞质结构区、一个跨膜区和一个长的胞外结构区，其中，胞外结构区富含N-或O-连接的糖基化基团。附着于卵巢癌细胞表面的蛋白会发生变化，其长度可能会截短，或者其侧链的改变，这些都将导致正常细胞与卵巢癌细胞的糖基化模式不同，例如，在恶性卵巢上皮细胞中，核心蛋白Tn的过早唾液酸化能够导致STn抗原(sialyl Tn抗原)的过度表达，使得血清中CA125蛋白的浓度异常增高。因此，CA125蛋白可以作为筛查卵巢癌等癌症的特异性标志物。

目前常采用免疫分析法来检测血浆中CA125蛋白含量，因此，需使用大量高质量的标准品作为对照，作为对照的CA125蛋白质需要活性高、稳定性好，经过长时间贮存且活性稳定。目前市售的CA125蛋白标准品的来源多样，例如，来自为乳腺癌细胞培养物或人体液。一般高品质CA125蛋白来源于天然提取，但是，由于天然提取的CA125蛋白来源有限，并且，目的蛋白含量低且蛋白结构不均一等原因，严重阻碍CA125蛋白标准品等诊断产品的研究和应用，因此，科研人员开始开发利用基因编辑和细胞工程大量生产CA125蛋白的方法。

发明内容

为解决上述问题，本申请提供一种CA125编码基因、融合有所述CA125编码基因的重组质粒、利用所述重组质粒在人源细胞株HEK293T细胞中分泌表达制备CA125蛋白的方法以及利用所述方法制备的CA125蛋白。

本申请的目的在于提供以下几个方面：

第一方面，一种编码基因，所述编码基因包括如下(1’)至(3’)中的至少一种：

(1’)如SEQ ID No.2所示的DNA分子；

(2’)在严格条件下与(1’)所示DNA分子杂交，并且编码CA125蛋白的DNA分子，其中，所述CA125蛋白，其如下(1)或者(2)所示：(1)如SEQ ID No.1所示的蛋白；(2)将SEQ IDNo.1所示的蛋白经过一个或者几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加并且具有相同功能的蛋白；

(3’)与(1’)或者(2’)所述氨基酸分子具有85％以上同一性，并且编码所述CA125蛋白的DNA分子。

本申请人发现，天然CA125蛋白分子较大，利用本申请提供的编码基因进行编码所得蛋白具有与天然CA125蛋白具有相似的活性，可替代天然CA125蛋白，作为检测CA125蛋白的标准品，然而，利用其它编码基因编码所得其它与天然CA125蛋白其余部分结构相似的蛋白则活性较低，无法作为检测CA125蛋白的标准品。

另外，本申请所提供的编码基因为优化的人源CA125编码基因，能够在人源细胞分泌系统，特别是HEK-293T细胞系统中表达，表达的目的蛋白活性高，稳定好。

第二方面，含有第一方面所述编码基因的重组质粒、转染细胞。

在一种可实现的方式中，所述重组质粒由pcDNA3.1 Z(+)载体与第一方面所述CA125编码基因融合而得。