[发明专利]一种柑橘黄龙病快速检测方法在审
| 申请号： | 202011065602.7 | 申请日： | 2020-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN112195223A | 公开（公告）日： | 2021-01-08 |
| 发明（设计）人： | 赵春江;董宏图;张晗;王晓冬;罗斌;王成;侯佩臣;李爱学 | 申请（专利权）人： | 北京农业智能装备技术研究中心;北京农业信息技术研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/689;C12Q1/06;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 陈征 |
| 地址： | 100097 北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 柑橘 黄龙 快速 检测 方法 | ||
1.一种柑橘黄龙病快速检测方法，包括：
提供从待测植物中获得的柑橘黄龙病病菌DNA；其中，所述柑橘黄龙病病菌DNA的浓度为20ng/μl；
以所述柑橘黄龙病病菌DNA为模板进行3次PCR扩增，扩增循环数分别为20-25次、25-30次和30-40次；
对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像系统得到扩增结果；
根据扩增结果获得待测植物柑橘黄龙病的发病程度。
2.根据权利要求1所述柑橘黄龙病快速检测方法，其中，所述的柑橘黄龙病病菌是指韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter spp.)。
3.根据权利要求1所述柑橘黄龙病快速检测方法，其中，是从待测植物的叶片中提取获得柑橘黄龙病病菌。
4.根据权利要求1所述柑橘黄龙病快速检测方法，其中，所用的特异性扩增引物为：
Hlbsf 5'→3'TGTAAAGCTCTTTCGCCGGA
Hlbsr 5'→3'CTTGACGTCATCCCCACCTT。
5.根据权利要求1所述柑橘黄龙病快速检测方法，其中，待测植物感病时间为1年-3年，例如1年、2年或3年。
6.根据权利要求1所述柑橘黄龙病快速检测方法，其中，以所述柑橘黄龙病病菌DNA为模板进行3次PCR扩增时，扩增循环数分别为20次、25次和30次。
7.根据权利要求1所述柑橘黄龙病快速检测方法，包括：
(1)取不同感病时间的黄龙病菌叶片，剪取叶中脉0.1g，剪成1mm左右碎片；放入2ml试管中，加入直径为5mm钢珠，放在研磨设备上进行震荡研磨5min，频率30Hz；
(2)将研磨好的植物样本用试剂盒进行DNA提取，所选试剂盒为StarSpin柱式植物DNA提取试剂盒，得到50μlDNA样品；
(3)用nanodrop仪器进行DNA浓度测量，并用ddH2O将DNA模板配制成浓度为20ng/μl工作液，待用；
(4)用已配置的工作液为模板，进行3次PCR扩增反应，反应循环数分别为20次、25次和30次；
(5)对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像系统得到扩增结果；
(6)根据扩增结果获得待测植物柑橘黄龙病的发病程度。
8.用于植物柑橘黄龙病快速检测的引物，所述引物为：
Hlbsf 5'→3'TGTAAAGCTCTTTCGCCGGA
Hlbsr 5'→3'CTTGACGTCATCCCCACCTT。
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