[发明专利]一种柑橘黄龙病快速检测方法

说明书

本发明实施例提供一种柑橘黄龙病快速检测方法，包括：提供从待测植物中获得的柑橘黄龙病病菌DNA；其中，所述柑橘黄龙病病菌DNA的浓度为20ng/μl；以所述柑橘黄龙病病菌DNA为模板进行3次PCR扩增，扩增循环数分别为20‑25次、25‑30次和30‑40次；对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像系统得到扩增结果；根据扩增结果获得待测植物柑橘黄龙病的发病程度。本发明方法可为黄龙病等植物病害的检测分级提供定性的判别依据，同时可针对不同感病程度进行有针对性的防治提供准确的评测手段。

技术领域

本发明涉及一种柑橘黄龙病快速检测方法。

背景技术

黄龙病是柑橘(包括橘、柑、橙、柚、枳等)生产上危害最严重，强破坏性的毁灭性病害。黄龙病被认为是由一种专生于柑橘韧皮部组织的细菌引起的，其传播途径包括苗木嫁接以及柑橘木虱传播。

目前所有已知的柑橘品种及柑橘近缘种都受到黄龙病病菌的侵染。感染病后的植株不仅不能产生经济价值，且易感程度高的品种如脐橙、葡萄柚等会在几年内逐渐衰亡，且目前尚无黄龙病治疗康复的相关报道。因此提供一种快速的黄龙病病菌鉴定分级方法，对于黄龙病的防控和研究具有重要的意义。

目前针对黄龙病病菌的诊断方法主要包括田间诊断、血清学方法诊断、电镜检测诊断和PCR检测诊断等手段。受到柑橘寄主植株内黄龙病病原菌浓度低、分布不均匀及样品制备技术等因素的限制，柑橘黄龙病原菌抗体多数均只能与相似的抗原结合，不能广泛应用于不同区域、品种的检测；电镜观察检测的检出率一般在70％左右，存在大量的漏检；目前常规PCR诊断方法在柑橘黄龙病检测上的应用已经实现了快速、准确、定性的要求，被广泛用于黄龙病的实验室诊断。但PCR只能对柑橘属果树是否感染黄龙病病菌进行检测，但无法有效区分感病植株的感病程度。由此提供一种简单、快捷、准确的柑橘黄龙病快速鉴定分级方法对于柑橘黄龙病田间防治、病树早期干预治疗具有重要意义。

发明内容

本发明实施例提供一种柑橘黄龙病快速检测方法，可为黄龙病等植物病害的检测分级提供定性的判别依据，同时可针对不同感病程度进行有针对性的防治提供准确的评测手段。

一种柑橘黄龙病快速检测方法，包括：

提供从待测植物中获得的柑橘黄龙病病菌DNA；其中，所述柑橘黄龙病病菌DNA的浓度为20ng/μl；

以所述柑橘黄龙病病菌DNA为模板进行3次PCR扩增，扩增循环数分别为20-25次、25-30次和30-40次；

对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像系统得到扩增结果；

根据扩增结果获得待测植物柑橘黄龙病的发病程度。

本文所述的柑橘黄龙病病菌是指韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter spp.)。

在一些实施例中，是从待测植物的叶片、茎(枝条)或根中获得柑橘黄龙病病菌DNA。实际操作中可取适量的待测植物的叶片、茎或根，按常规方法提取其中的柑橘黄龙病病菌即可。

在一些实施例中，是从待测植物的叶片(例如0.1g)中提取获得柑橘黄龙病病菌。

在一些实施例中，待测植物(例如柑橘)感病时间为1年-3年，例如1年、2年或3年。

在一些实施例中，采用StarSpin柱式植物DNA提取试剂盒，获得土壤农杆菌DNA。

在一些实施例中，所用的特异性扩增引物为：