[发明专利]一种降嘌呤和尿酸的益生菌株、组合物及其应用

权利要求书

1.一株植物乳杆菌株(Lactobacillus plantarum)KLpl-3，其特征在于，该菌株已于2020年7月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020366。

2.一种降低血尿酸的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌组合物的活性成分包含权利要求1所述的植物乳杆菌株KLpl-3。

3.根据权利要求1所述的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌组合物含有植物乳杆菌株KLpl-3的活菌数为1*10⁶～5*10¹²cfu/g组合物。

4.权利要求1所述的植物乳杆菌株KLpl-3或权利要求2或3所述的降低血尿酸的益生菌组合物在制备预防和治疗高尿酸血症和/或痛风的药物或食品中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物是供口服的剂型。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述剂型是选自：溶液、悬浮液、乳剂、粉末、锭剂、丸剂、糖浆、口含锭、片剂、口嚼胶、浓浆以及胶囊。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的食品，包括普通食品，保健食品，或特殊医学用途配方食品。

8.一种用于筛选降解嘌呤前体的益生菌的含营养的测定反应体系，其组成为：10-50mM磷酸盐，质量百分比为0.1-1.0％葡萄糖，0.1-0.75％酵母粉和0.1-0.5％硫酸铵，其余为水，pH6.0-7.5。

9.一种降解嘌呤前体的益生菌的筛选方法，包括如下步骤：

1)在只含嘌呤前体的无营养体系筛选益生菌降解嘌呤前体的能力：

a.在只含嘌呤前体的无营养体系筛选益生菌降核苷和核苷酸的能力：将待筛选菌株活化，接种至MRS培养基中培养，在37℃下兼性厌氧或氧浓度0.5％的严格厌氧条件下静置培养8～20h，离心收集菌体，用100mM，pH7.0磷酸盐缓冲液洗涤3遍后，调整至OD₆₀₀＝2.7，分别加入含0.7mg/mL的腺苷酸，鸟苷酸，肌苷酸，腺苷，鸟苷和肌苷的20mM，pH6.86磷酸盐测试缓冲体系中，菌体终浓度为OD₆₀₀＝0.6，37℃孵育反应1h，8000g离心5min，取上清900μl，加入100mM高氯酸溶液100μl终止反应，0.22μm膜过滤，然后用高效液相色谱仪进行检测；

b.在只含嘌呤前体的无营养体系筛选益生菌降脱氧核苷和脱氧核苷酸的能力：将步骤1)筛选到的优势益生菌株进一步以脱氧鸟苷，脱氧腺苷及脱氧腺苷酸，脱氧鸟苷酸为底物进行筛选测试，测试条件同步骤a)，然后用高效液相色谱仪进行检测；

2)在含嘌呤前体的有营养体系筛选益生菌降解嘌呤前体的能力：

a.在含嘌呤前体的有营养体系筛选益生菌降核苷和核苷酸的能力：将步骤1)获得的候筛菌株调整到OD₆₀₀为2.7，分别加入含0.7mg/mL的腺苷酸、鸟苷酸、肌苷酸、腺苷、鸟苷和肌苷的含营养的测定反应体系中，调整菌体浓度OD₆₀₀＝0.3，反应3h终止反应时，离心取出900μl上清液，加入100μl高氯酸终止液，过0.22μm滤膜后上HPLC检测嘌呤前体的降解效率；所述含营养的测定反应体系的组成为：20mM磷酸盐，0.2％葡萄糖，0.25％酵母粉和0.2％硫酸铵，其余为水，pH6.86；

b.在含嘌呤前体的有营养体系筛选益生菌降脱氧核苷和脱氧核苷酸的能力：将步骤1)获得的候筛菌株调整到OD₆₀₀为2.7，分别加入含0.7mg/mL的脱氧腺苷酸，脱氧鸟苷酸，脱氧腺苷，脱氧鸟苷的含营养的测定反应体系中，调整菌体浓度OD₆₀₀＝0.3，反应3h终止反应时，离心取出900μl上清液，加入100μl高氯酸终止液，过0.22μm滤膜后上HPLC检测嘌呤前体的降解效率；所述含营养的测定反应体系其组成为：20mM磷酸盐，0.2％葡萄糖，0.25％酵母粉和0.2％硫酸铵，其余为水，pH6.86。

10.一种降尿酸的益生菌的筛选方法，包括如下步骤：

a.将测试菌株进行活化后，接种至MRS培养基中培养，在37℃下兼性厌氧条件下静置培养8～20h，离心收集菌体，用100mM，pH7.0磷酸盐缓冲液洗涤3遍后，调整至OD₆₀₀＝2.7，取10uL点到含尿酸的琼脂平板上，所述尿酸的琼脂平板的组成为：尿酸4g/L，NaCl 0.5g/L，MgSO₄0.5g/L，K₂HPO₄2.0g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，琼脂1.5％，其余为水，调至pH6.0-6.5，置于氧浓度0.5％的厌氧箱培养3-5天，观察尿酸降解产生的透明圈，根据透明圈的大小，初步判定尿酸的降解能力；

b.将步骤a)筛选到的有尿酸降解能力的益生菌株进行活化培养，离心收集菌体，然后接入灭菌的含1.0g/L尿酸的MRS培养基，调整OD为1.0，厌氧培养箱静置培养24h，48h，取培养基离心去除菌体沉淀，取上清液测定剩余尿酸浓度，以确定其尿酸降解能力。