[发明专利]一种基于构建双功能酶合成PAPS的方法有效
| 申请号： | 202011069389.7 | 申请日： | 2020-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN113046402B | 公开（公告）日： | 2023-04-28 |
| 发明（设计）人： | 康振;王阳;胥睿睿;堵国成;陈坚 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12P19/32 | 分类号： | C12P19/32;C12N9/12 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 构建 功能 合成 paps 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种合成3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸的方法，其特征在于，以ATP为底物，利用PAPS合成双功能酶合成3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸；所述PAPS合成双功能酶是由ATP硫酸化酶和APS激酶通过融合接头序列连接而成的ATP硫酸化酶和APS激酶的融合蛋白；所述融合接头序列如SEQ ID NO.1～5任一所示；所述ATP硫酸化酶来源于酿酒酵母；所述APS激酶来源于大肠杆菌。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述融合接头序列重复多次，重复次数小于6次。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述ATP硫酸化酶第215位～218位的P环上氨基酸序列HRAH突变为HNGH或HAGH。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，催化合成3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸的催化体系中缓冲液为10～50mM Tris-HCl，pH为6.0～8.0，添加2～20mM ATP、1～5mM硫酸镁，0.5～1.0mg/mL PAPS合成双功能酶。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，催化体系添加保护剂甘油、BSA、DTT中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述催化反应温度为20～40℃，催化时间为24～72h。
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