[发明专利]肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法

说明书

本发明提供一种肺癌组织中PD‑L1蛋白的检测方法，采用热变性介导的去糖基化方法对PD‑L1去糖基化处理后，再利用免疫组织化学方法检测PD‑L1蛋白表达状态。本发明方法采用热变性介导的去糖基化可显著提高PD‑L1(使用28‑8,CAL10,SP142抗体)的阳性检出率；去糖基化检测在本底PD‑L1低检出的病例中可获得更显著的提高，综上，采用热变性介导的去糖基化检测方法可成为确定PD‑1/PD‑L1免疫检查点抑制剂治疗获益患者的重要方法。

技术领域

本发明涉及一种肿瘤组织中PD-L1蛋白的检测方法，尤其涉及一种肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法。

背景技术

细胞程序式死亡配体1(Programmed cell death 1ligand 1，PD-L1)，也称为表面抗原分化簇274(cluster of differentiation 274，CD274)或B7同源体(B7 homolog1，B7-H1)，是人类体内的一种蛋白质，由CD274基因编码。包括肺癌在内的多种恶性肿瘤细胞通过表达PD-L1来诱导形成免疫抑制性的肿瘤微环境，逃避机体的抗肿瘤免疫反应，使肿瘤细胞免于机体免疫系统的监视和清除。研究显示PD-L1在肺癌组织中的表达水平与患者的临床病理参数及预后存在显著的相关性。PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂在肺癌患者的治疗中表现出了令人惊喜的疗效及良好的耐受性，也提示了免疫治疗可以作为一种安全而有效的治疗方式。以PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂为代表的免疫治疗成为肺癌的治疗领域的新焦点。

目前决定肺癌患者能否接受PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂治疗通常取决于PD-L1的表达状态。免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)检测方法是评估肺癌组织标本中的PD-L1蛋白表达状态常用方法，该方法被认为是PD-L1检测的通行标准。此外，应用不同克隆号PD-L1抗体检测的表达状态用于不同PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂的治疗指导。但越来越多的研究显示IHC方法用于PD-L1检测仍有较多局限性，最突出的是部分PD-L1阴性的患者在接受PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂治疗后仍有显著的疗效。因此，更精确的免疫治疗分层标准仍有待进一步探究。

PD-L1是一个过糖基化修饰蛋白。糖基化的PD-L1存在于多种类型的肿瘤细胞中，包括黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、结肠癌等。PD-L1蛋白在Western blotting检测上显示出一种异质性模式：存在与肿瘤细胞中的PD-L1在50kDa的位置处出现条带，而非糖基化形式的PD-L1在33kDa的位置处出现条带。

越来越多的证据表明PD-L1糖基化在PD-1/PD-L1介导的肿瘤免疫抑制中起重要作用。近期研究显示，通过对肿瘤组织切片进行去糖基化处理，可以显著提高PD-L1(28-8)的阳性检出率，同时，PD-L1常规IHC检测阴性的患者，若去糖基化检测结果为阳性，在接受免疫治疗后仍有较好疗效。

通常，去糖基化步骤可分为有、无热变性介导的两种技术方案，其中热变性介导的方法被认为是一种更彻底的去糖基化方法。现有的文献表明通过对肿瘤组织切片进行无热变性介导的去糖基化处理，可以显著提高PD-L1(28-8)的阳性检出率。但是，热变性介导的去糖基化方案能否提高PD-L1检出率、以及不同克隆号的PD-L1抗体是否对去糖基化方案有反应目前均未有相关研究报道。

发明内容

技术问题：为了解决现有技术的缺陷，本发明提供了一种肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法。

技术方案：本发明提供一种肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法，采用热变性介导的去糖基化方法对PD-L1去糖基化处理后，再利用免疫组织化学检测方法检测PD-L1蛋白表达状态。

优选地，所述PD-L1检测抗体包括PD-L1 28-8、PD-L1 CAL10、PD-L1 SP142。

本发明提供了一种肺癌组织中PD-L1蛋白的检测方法，包括以下步骤：