[发明专利]用于2019新型冠状病毒检测的引物组、恒温显色筛查试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于2019新型冠状病毒检测的引物组，其特征在于，其包括用于等温扩增检测的外引物对、内引物对和环引物对，所述外引物对的序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，所述内引物对的序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示，所述环引物对的序列如SEQID No.5和SEQ ID No.6所示。

2.一种用于2019新型冠状病毒检测的恒温显色筛查试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：如权利要求1所述的引物组、链置换Bst DNA聚合酶和逆转录酶。

3.根据权利要求2所述的恒温显色筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括钙黄绿素、dNTPs、KCl和MgCl₂。

4.根据权利要求2所述的恒温显色筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照，所述阳性对照为含S基因体外转录RNA的序列的质粒作为阳性对照，所述S基因体外转录RNA的序列如SEQ ID NO.7所示，所述阴性对照为去核酸的灭菌水。

5.一种用于2019新型冠状病毒检测的恒温显色方法，其特征在于，该方法是非诊断目的的检测方法，具体包括以下步骤：

(1)从样品中提取RNA；

(2)对步骤(1)提取的所述RNA进行等温扩增；其中，在反应体系中，采用如上所述用于2019新型冠状病毒检测的引物组，置于63℃恒温反应；

(3)在所述恒温反应进行30min后取出反应，观察结果

(4)结果判定：待测样品中若呈现绿色，则判断为阳性，若呈现浅橘色，则判断为阴性。

6.根据权利要求5所述的恒温显色方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述等温扩增的反应体系，具体如下：反应总体积为25μL，其中，所述反应体系中含有S-1:反应液：8×10⁵U/LRnasin，200mM dNTPs，10mM Tris-HCl(pH＝8.3)，20mM KCl，3.5mM MgCl₂，0.8M betaine，1.6μM内引物对，0.2μM外引物对，0.8μM环引物对，1.6μM内引物对总共20.3μL，钙黄绿素1μL，Bst聚合酶1.5μL，AMV酶0.2μL，样品RNA模板2.0μL。

7.根据权利要求5所述的恒温显色方法，其特征在于，同时设置无核酸酶水为阴性对照；采用含S基因体外转录RNA的序列质粒作为阳性对照，所述S基因体外转录RNA的序列如SEQ ID NO.7所示。