[发明专利]一种从血浆组分Ⅳ沉淀中提取人血白蛋白的方法

权利要求书

1.一种使用血浆分离组分Ⅳ(FⅣ)沉淀为原料，制备人血白蛋白的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)FⅣ沉淀溶解并过滤去除不溶杂质；

(2)阴离子亲和层析；

(3)超滤浓缩并配置；

(4)巴氏消毒及过滤分装；

其特征在于，

步骤(1)所述的FⅣ沉淀溶解为，使用FⅣ沉淀4～6倍质量的稀释缓冲液溶解FⅣ沉淀，所述的稀释缓冲液成分为：10～20mM Tris，10～20mM柠檬酸，120～140mM NaCl；pH 7.5；

步骤(2)所述的阴离子亲和层析方法中：

所述的层析填料为：以Sepharose为基质，促皮质素(Cibacron)为亲和结构域，以三嗪基为偶联剂偶联而成的高分子层析填料；

所述的层析缓冲液包括：

平衡缓冲液：10～20mM Tris，10～20mM柠檬酸(Citrate)，120～140mM NaCl，pH 6.0～7.5；

洗涤缓冲液：10～20mM Tris，10～20mM柠檬酸(Citrate)，120～140mM NaCl，pH 6.0～7.5；

洗脱缓冲液：30～50mM柠檬酸(Citrate)，30～50mM正辛酸(Caprylate)，pH 6.0～7.5。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的阴离子亲和层析的步骤为：

1)平衡：用3～5柱体积(CVs)平衡缓冲液冲洗层析柱，流速50～120cm/h线速度，冲洗完毕后，确认平衡缓冲液的pH值变化满足△pH0.2、电导率值变化满足△Cond1mS/cm；

2)上样：流速50～120cm/h线速度上样；

3)冲洗：用平衡缓冲液冲洗层析柱，流速50～120cm/h线速度；

4)洗脱：用3～5CVs洗脱缓冲液冲洗层析柱，流速50～120cm/h线速度，收取含目标蛋白的洗脱液。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，

步骤(3)所述的超滤为：

1)超滤膜：10KD；

2)超滤透析液：0.9％的氯化钠溶液；

3)最终浓缩至浓缩液的蛋白含量10％～20％；

步骤(3)所述的配置为：

按0.160mmol/g蛋白质的浓度加入辛酸钠。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，

步骤(4)所述的巴氏灭活：60℃、持续10小时；

步骤(4)所述的过滤分装：用0.2μm除菌级滤器过滤样品。