[发明专利]一种从血浆组分Ⅳ沉淀中提取人血白蛋白的方法

说明书

本发明涉及一种从血浆组分Ⅳ沉淀中提取人血白蛋白的方法，所述方法包括如下步骤：(1)FⅣ沉淀溶解并过滤去除不溶杂质；(2)阴离子亲和层析；(3)超滤浓缩并配置；(4)巴氏消毒及过滤分装。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体的，涉及一种从血浆组分Ⅳ沉淀中提取人血白蛋白的方法。

背景技术

人血白蛋白(HSA)是人体血浆中含量最高的蛋白质(42±3.5g/L)，占血浆总量的50％～60％。人血白蛋白的一级结构简单，是一种单链、非糖基化蛋白质，无碳水化合物侧链，仅含少量的脂肪酸，构型较为对称，分子量约为69kD，成熟的白蛋白由585个氨基酸残基组成，等电点为4.7～5.7。

人血白蛋白药理学作用包括：

1、增加血容量和维持血浆胶体渗透压：白蛋白占血浆胶体渗透压的80％，主要调节组织与血管之间水分的动态平衡。

2、运输及解毒：白蛋白能结合阴离子也能结合阳离子，可以输送不同的物质，也可以将有毒物质输送到解毒器官。

3、营养供给：组织蛋白和血浆蛋白可互相转化，在氮代谢障碍时，白蛋白可作为氮源为组织提供营养。

人血白蛋白在临床上主要应用于出血性休克、外伤性体克、烧伤、肝硬化伴腹水和水肿、肝硬化并发肝性脑病、恶性肿瘤、肾病水肿等；其他如血浆交换、手术后处理等。

目前国内外主要采用低温乙醇法由健康人血浆分离组分Ⅴ(FⅤ)，进而以组分Ⅴ制备人血白蛋白。提取人血白蛋白后产生的组分Ⅳ(FⅣ)沉淀，通常都被作为废物处理掉，鲜有从该组分中纯化人血白蛋白的，主要原因在于组分Ⅳ所含成分复杂，杂质含量高。

当前中国血浆资源极其有限。所以开发高效地从组分Ⅳ中纯化人血白蛋白生产工艺，提高血浆综合利用率，具有一定的社会效益和经济效益。。

发明内容

本发明首先涉及一种使用血浆分离组分Ⅳ(FⅣ)沉淀为原料，制备人血白蛋白的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)FⅣ沉淀溶解并过滤去除不溶杂质；

(2)阴离子亲和层析；

(3)超滤浓缩并配置；

(4)巴氏消毒及过滤分装；

步骤(1)所述的FⅣ沉淀溶解为，使用FⅣ沉淀4～6倍质量的稀释缓冲液溶解FⅣ沉淀，所述的稀释缓冲液成分为：10～20mM Tris，10～20mM柠檬酸，120～140mM NaCl；pH7.5；

步骤(2)所述的阴离子亲和层析方法中：

所述的层析填料为：以Sepharose为基质，促皮质素(Cibacron)为亲和结构域，以三嗪基为偶联剂偶联而成的高分子层析填料；

所述的层析缓冲液包括：

平衡缓冲液：10～20mM Tris，10～20mM柠檬酸(Citrate)，120～140mM NaCl，pH6.0～7.5；

洗涤缓冲液：10～20mM Tris，10～20mM柠檬酸(Citrate)，120～140mM NaCl，pH6.0～7.5；

洗脱缓冲液：30～50mM柠檬酸(Citrate)，30～50mM正辛酸(Caprylate)，pH 6.0～7.5；

步骤(2)所述的阴离子亲和层析的步骤为：

1)平衡：用3～5柱体积(CVs)平衡缓冲液冲洗层析柱，流速50～120cm/h线速度，冲洗完毕后，确认平衡缓冲液的pH值变化满足△pH0.2、电导率值变化满足△Cond1mS/cm；