[发明专利]单侧单孔双点位帕金森大鼠模型造模方法和单侧单孔双点位帕金森大鼠模型

说明书

本发明属于帕金森治疗技术领域，具体涉及单侧单孔双点位帕金森大鼠模型造模方法和单侧单孔双点位帕金森大鼠模型。单侧单孔双点位帕金森大鼠模型造模方法包括脑定位步骤和定点注射步骤。定点注射步骤中根据大鼠的脑立体定位图谱在大鼠的脑部单侧确定第一注射点和第二注射点的位点坐标，基于第一注射点和第二注射点的位点坐标在该侧单开孔，并用微量注射针进行定点注射。本申请提供的帕金森大鼠模型及其造模方法，采用单侧开孔双点位注射的方法进行帕金森动物模型的构造，造模后第二周成功率达到80％，第三周成功率达到100％，不但显著提高了造模成功率，还能够减少模型的机械损伤，提高造模安全性，缩短建模时长，有效提高造模效率。

技术领域

本发明属于帕金森治疗技术领域，具体涉及单侧单孔双点位帕金森大鼠模型造模方法和单侧单孔双点位帕金森大鼠模型。

背景技术

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见的以黑质纹状体通路退变为主要特征的慢性中枢神经退行性疾病，以①中脑黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元的变性死亡，伴随由此而引起的纹状体DA含量的显著性减少；②由alpha-突触核蛋白(α-synuclein)错误折叠而产生的路易氏体(Lewy bodies)为主要病理特征，可累及不同神经递质系统和不同神经系统区域。PD的发病机制尚未完全明确，目前尚无有效根治或者逆转病情的药物。为了更好地了解帕金森病的病理机制并寻求更有效的治疗药物，建立帕金森病动物模型至关重要。

按照不同的处理方式，PD动物模型可分为三类：神经毒素模型、转基因模型与二者联用模型。神经毒素模型是最早使用在PD研究中的动物模型，也是目前最常用来评价PD治疗效果的手段之一。该类模型操作简单，成本较低，结果重复性好，较其他模型优势明显，在实际研究中使用较为广泛。目前使用最多的神经毒素主要为：6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)、1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine，MPTP)及农药类神经毒素如鱼藤酮、百草枯等等。转基因模型通过使用遗传学的相关方法，对特定物种进行PD相关基因修饰，可制造出与PD相关的转基因动物模型。转基因模型及二者联用模型成本高，使用范围较小，常用于研究从基因分子水平的PD发病机制及病理变化。

6-OHDA是一种结构类似于儿茶酚胺的物质，于1960年首次用于PD动物模型的研究中，该模型的特点是病程迅速，操作简单，重复性、稳定性及安全性高，应用广泛，可用于PD的分子水平、细胞层面、药物预防与治疗效果评价等方面的实验研究。主要通过定点注射6-OHDA造模，常用的脑区包括纹状体、黑质致密部、中脑腹侧被盖区和内侧前脑束。造模后通过阿扑吗啡诱导健侧旋转验证模型成功率(大鼠通常采用7转/分钟为标准)，据研究表明阿扑吗啡诱导动物的旋转圈数与黑质多巴胺能神经元的损毁程度成正比，即多巴胺能神经元损伤轻微时，黑质-纹状体通路的代偿作用造成应用阿朴吗啡后，不出现旋转现象。只有当多巴胺能神经元损毁至一定程度时，阿扑吗啡诱导旋转行为才会出现。当单侧注射时，其运动症状较为明显且一般不会出现双侧运动障碍，利于实验者观察。注射方法包括单侧单点注射法及单侧多点注射法。单侧单点法模型损伤程度不一，成功率一般不超过50％。单侧多点法通常采用两个脑区联合或单个脑区不同坐标，是目前使用最多的模型之一。根据既往国内外文献报道，单侧两点法的成功率在32％-92％之间不等，多数研究造模成功率低于80％，且需造模第4周后才成功。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了单侧单孔双点位帕金森大鼠模型造模方法和单侧单孔双点位帕金森大鼠模型，以解决现有技术中存在的技术问题。

本发明为解决其技术问题而提供的单侧单孔双点位帕金森大鼠模型造模方法为：

一种单侧单孔双点位帕金森大鼠模型造模方法，其特征在于，包括：

脑定位步骤，保持大鼠颅顶水平，以微量注射针针尖为准，量取前囟、后囟中心点的纵坐标，将前囟、后囟调至同一水平；