[发明专利]一种猪链球菌c-di-AMP合成酶抑制剂的筛选方法及其应用有效
| 申请号： | 202011081126.8 | 申请日： | 2020-10-11 |
| 公开（公告）号： | CN112362640B | 公开（公告）日： | 2021-10-26 |
| 发明（设计）人： | 周锐;李昊天;李婷婷;黎璐;黄琦 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | G01N21/76 | 分类号： | G01N21/76 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所(普通合伙) 42001 | 代理人： | 张红兵 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 链球菌 di amp 合成 抑制剂 筛选 方法 及其 应用 | ||
1.一种基于化学发光的猪链球菌c-di-AMP合成酶抑制剂IPA-3的高通量筛选方法，其特征在于,所述抑制剂IPA-3小分子的化学结构式如下所示：
所述的筛选方法包括如下步骤：
(1)在黑色的U型底384孔板中加入4.5μL包含终浓度为150mM的NaCl，10mM的MgCl2,50mMl pH7.5的Tris-HC，100μM c-di-AMP重组蛋白的混合体系，用多通道移液器加浓度为0.5μL，体积为10mM溶于二甲基亚砜的药物，设置阳性对照与阴性对照各10个重复；
(2)将所述384孔板置于4℃孵育30min，然后加5μL 1mM ATP，置于37℃反应2h后取出在室温下冷却5min，加入10μL Reagent，反应10min后，用酶标仪测量相对发光值RLU；
(3)采用如下公式计算药物酶活的抑制率：
药物酶活抑制率＝(待测药物化学发光值–阳性组化学发光平均值)/(阴性组化学发光平均值–阳性组化学发光平均值)；
(4)按照上述步骤对MedChemExpress公司的激酶抑制剂药库HY-L001进行筛选，得到对c-di-AMP酶活抑制率为82.33％的抑制剂IPA-3。
2.权利要求1所述的方法在猪链球菌c-di-AMP合成酶抑制剂IPA-3筛选中的应用。
3.应用权利1所述方法筛选得到的猪链球菌c-di-AMP合成酶的抑制剂IPA-3。
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