[发明专利]一种细胞外泌体提纯装置及方法

权利要求书

1.一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，包括第一中空纤维柱和第二中空纤维柱，所述第一中空纤维柱内腔两端分别与原液瓶连通形成精滤回路，所述第二中空纤维柱内腔两端分别与中转瓶连通形成浓缩回路；所述第一中空纤维柱的外腔通过滤液管路与所述中转瓶连接，所述滤液管路上连接有第一手动夹；所述精滤回路上在所述原液瓶的出液口处依次连接有第一过滤膜和第一蠕动泵，所述浓缩回路上在所述中转瓶的出液口处连接有第二蠕动泵；所述浓缩回路上还连接有第三中空纤维柱，所述第三中空纤维柱与所述第二中空纤维柱并联布置；所述精滤回路中，所述第一中空纤维柱的出液管路上安装有第一调压阀；所述浓缩回路中，所述第二中空纤维柱的出液管路上安装有第二调压阀，所述第三中空纤维柱的出液管路上安装有第三调压阀；所述浓缩回路上，所述第二中空纤维柱和第三中空纤维柱的进液管路分别通过收获管路与收获瓶连接，所述收获管路上安装有第三蠕动泵和控制阀；

所述第二中空纤维柱的外腔通过第一废液管路与第一废液瓶连接，所述第三中空纤维柱的外腔通过第二废液管路与第二废液瓶连接，所述第一废液管路上连接有第二手动夹，所述第二废液管路上连接有第三手动夹；所述精滤回路上在所述原液瓶的进液口处通过第一输液管路连接第一盐水袋，所述第一中空纤维柱与所述中转瓶之间的管路上通过第二输液管路连接第二盐水袋，所述第一输液管路上连接有第一输液管夹，所述第二输液管路上连接有第二输液管夹；

所述第一中空纤维柱的孔径为200-400nm，所述第二中空纤维柱的孔径为30-35nm，所述第三中空纤维柱的孔径为5-10nm；

采用所述细胞外泌体提纯装置进行细胞外泌体提纯的方法包括以下步骤：

步骤1，设备上样：向进液瓶中灌入细胞外泌体原液样品，利用成品泵将样品泵到原液瓶中，打开第一调压阀、第二调压阀、第三调压阀；关死第一手动夹、第二手动夹、第三手动夹；利用第一蠕动泵将原液瓶中的样品泵入到精滤回路的第一中空纤维柱中；

步骤2，开始第一次浓缩：打开第一手动夹，关死第一调压阀，将经过第一中空纤维柱过滤的样品滤液进入中转瓶中，中转瓶液量增加到一定量时，关死第二手动夹，打开第二调压阀；待第二中空纤维柱的浓缩回路全部充满样品滤液之后打开第二手动夹，关死第二调节阀；

此时第一蠕动泵和第二蠕动泵均同时运行，一次浓缩提纯的细胞外泌体留在第二中空纤维柱中，浓缩废液进入到第一废液瓶中；

步骤3，收集第一次浓缩液：当样品全部用完之后，中转瓶液量快见底的时候，打开第二输液管夹放入生理盐水，打开第二调压阀、关死第二手动夹；通过第二蠕动泵将生理盐水泵入到第二中空纤维柱中对其内的细胞外泌体清洗，并通过收获管路及其上的第三蠕动泵将一次浓缩液泵入到收获瓶中进行收获；

步骤4，开始第二次浓缩：打开第三调压阀、关死第三手动夹；第三中空纤维柱内腔循环管路全部充满样品液之后打开第三手动夹，关死第三调节阀，待中转瓶液量全部浓缩完毕之后停止；

步骤5，收集第二次浓缩液：打开第三调压阀、关死第三手动夹；同S6进行收集；

步骤6，清洗：多次重复清洗内腔，每清洗完一次就倒掉原液瓶和中转瓶中的液体，直到液体不浑浊为止；多次重复清洗外腔，每清洗完一次就倒掉原液瓶和中转瓶中的液体，直到液体不浑浊为止；

步骤7，第一中空纤维柱、第二中空纤维柱、第三中空纤维柱、精滤回路和浓缩回路以及收获管路中均灌入NaOH保养。

2.根据权利要求1所述一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，所述第一中空纤维柱、第二中空纤维柱和第三中空纤维柱的进液管路上分别安装有压力监测装置；所述浓缩回路中，所述第二中空纤维柱和第三中空纤维柱的进液管路和出液管路上均安装有控制阀。

3.根据权利要求1所述一种细胞外泌体提纯装置，其特征在于，所述浓缩回路上连接有大气接入管，所述大气接入管上连接有第二过滤膜和控制阀。