[发明专利]共表达分泌型IL-7和选择性CCL19的表达载体及其应用

权利要求书

1.一种共表达分泌型IL-7和选择性CCL19的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括IL-6信号肽编码基因、IL-7编码基因、NFAT调控型启动子和CCL19编码基因。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述IL-6信号肽编码基因包括SEQ IDNO:1所示的核酸序列；

优选地，所述IL-7编码基因包括SEQ ID NO:2所示的核酸序列；

优选地，所述NFAT调控型启动子包括SEQ ID NO:3所示的核酸序列；

优选地，所述CCL19编码基因包括SEQ ID NO:4所示的核酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括病毒载体；

优选地，所述病毒载体包括慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种，优选为慢病毒载体。

4.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒采用权利要求1-3任一项所述的表达载体与包装辅助质粒共转染哺乳细胞制备得到；

优选地，所述哺乳细胞包括293细胞、293T细胞或293F细胞中的任意一种或至少两种的组合。

5.一种嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体T细胞表达特异性结合肿瘤抗原的嵌合抗原受体、分泌型IL-7和选择性CCL19；

优选地，所述嵌合抗原受体T细胞包括权利要求1-3任一项所述的表达载体和/或权利要求4所述的重组慢病毒。

6.根据权利要求5所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、跨膜结构域和信号传导结构域；

优选地，所述抗原结合结构域结合肿瘤表面抗原，所述肿瘤表面抗原包括CD19、CD20、CD22、CD30、CEA、EGFR、BRAF、HER-2、Mesothelin、MUC1、PSCA、GPC3、TERT、PTEN、PD-1、PD-L1或VEGF中的任意一种，优选为CD19、MUC1、GPC3、Mesothelin、PSCA或HER2中的任意一种，进一步优选为Mesothelin；

优选地，所述跨膜结构域包括CD28跨膜结构域和/或CD8α跨膜结构域，优选为CD8α跨膜结构域；

优选地，所述信号传导结构域包括CD28胞内结构域、CD3ζ、TLR2、4-1BB、TLR1、CD27、OX40或DAP10中的任意一种或至少两种的组合，优选为4-1BB和CD3ζ的组合；

优选地，所述嵌合抗原受体由GM-CSF信号肽、Mesothelin抗原结合结构域、CD8α跨膜结构域、4-1BB和CD3ζ串联组成；

优选地，所述嵌合抗体受体包括SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。

7.根据权利要求5或6所述的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述分泌型IL-7包括SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；

优选地，所述选择性CCL19包括SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

8.一种权利要求5-7任一项所述的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将权利要求1-3任一项所述的表达载体或权利要求4所述的重组慢病毒导入表达CAR分子的T细胞的步骤。

9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求5-7任一项所述的嵌合抗原受体T细胞；

优选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或至少两种的组合。

10.权利要求1-3任一项所述的表达载体、权利要求4所述的重组慢病毒、权利要求5-7任一项所述的嵌合抗原受体T细胞或权利要求9所述的药物组合物在制备实体瘤治疗药物中的应用。