[发明专利]LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的引物组，其特征在于，包括：用于检测甲型流感病毒的甲型流感病毒扩增引物、用于检测乙型流感病毒的乙型流感病毒扩增引物及用于检测新型冠状病毒的2019-nCOV病毒扩增引物组，甲型流感病毒扩增引物的F3、B3、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:8所示，乙型流感病毒扩增引物的F3、B3、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:9～SEQ ID NO:12所示，2019-nCOV病毒扩增引物组由N基因扩增引物和ORF1ab基因扩增引物中的一组或两组组成，N基因引物的F3、B3、LF、LB、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:13～SEQ ID NO:18所示，ORF1ab基因引物的F3、B3、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:19～SEQ ID NO:22所示。

2.LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的引物组。

3.根据权利要求2所述的LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所示甲型流感病毒扩增引物的F3、B3、FIP、BIP的加入量比例为0.5:0.5:4:4，乙型流感病毒扩增引物的F3、B3、FIP、BIP的加入量比例为0.5:0.5:4:4，N基因引物的F3、B3、LF、LB、FIP、BIP的加入量比例为0.5:0.5:1:1:4:4，ORF1ab基因引物的F3、B3、FIP、BIP的加入量比例为0.5:0.5:4:4。

4.根据权利要求2或3所述的LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，还包括内参基因及用于检测内参基因的内参基因扩增引物。

5.根据权利要求4所述的LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述内参基因为人源CALR基因，人源CALR基因序列如SEQ ID NO:23所示；内参基因扩增引物的F3、B3、LF、LB、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:24～SEQ ID NO:29所示。

6.根据权利要求4所述的LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，还包括分别与甲型流感病毒扩增引物、乙型流感病毒扩增引物、N基因扩增引物、ORF1ab基因扩增引物、内参基因扩增引物对应的五组反应体系，每组反应体系均包括相应的缓冲液、MgSO₄、Betaine、dNTPS、dUTP、显色剂、Bst DNA聚合酶、UNG酶以及逆转录酶。

7.根据权利要求6所述的LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，每组所述反应体系的体积为23ul，包括以下各物质：2.5ul的缓冲液、0.75～1.5ul的MgSO₄、2～4ul的Betaine、2.5～3.75ul的dNTPS、1ul的dUTP、0.5ul的显色剂、1ul的Bst DNA聚合酶、0.125ul的UNG酶以及0.1ul的逆转录酶，还包括以下各引物：0.5ul的F3、0.5ul的B3、0或1ul的LF、0或1ul的LB、4ul的FIP、4ul的BIP。

8.LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取纯化样品的核酸；

2)配制如权利要求2中试剂盒中的LAMP反应体系，进行环介导等温扩增反应；

3)结果判断。

9.根据权利要求8所述的LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠状病毒的方法，其特征在于，扩增条件为60～65℃，30～60min，30～60s收集一次信号。