[发明专利]一种补肾活血方化学成分的检测方法

权利要求书

1.一种补肾活血方化学成分的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将补肾活血方的中药置于水中浸泡后回流提取，得到水提取液；所述补肾活血方的中药组分为杜仲、补骨脂、怀牛膝、丹参、威灵仙和木瓜；

(2)将所述水提取液依次进行浓缩、乙醇萃取、静置和离心分离，得到乙醇水上清液；除去所述乙醇水上清液中的乙醇，得到水萃取液；

(3)采用乙酸乙酯萃取所述水萃取液，得到第一水相；

(4)采用正丁醇萃取所述第一水相，得到第二水相；浓缩所述第二水相，得到待测液；

(5)采用高效液相色谱-质谱法对所述待测液进行检测，将所得检测结果对照标准色谱图和天然产物数据库，得到待测液中的化学成分；

所述高效液相色谱-质谱法的高效液相色谱检测条件为：

色谱柱：C₁₈色谱柱；

柱温：30℃；

洗脱方式：梯度洗脱，流动相A为0.1v/v％甲酸水溶液，流动相B为0.1v/v％甲酸乙腈溶液；所述流动相A和流动相B的流速为0.3mL/min；

检测波长：190～500nm；

所述梯度洗脱的程序如下：

0～2min，所述流动相A的体积百分含量为98％，所述流动相B的体积百分含量为2％；

2～7min，所述流动相A的体积百分含量由98％匀速降低到85％，所述流动相B的体积百分含量为由2％匀速增加到15％；

7～14min，所述流动相A的体积百分含量由85％匀速降低到75％，所述流动相B的体积百分含量为由15％匀速增加到25％；

14～21min，所述流动相A的体积百分含量由75％匀速降低到70％，所述流动相B的体积百分含量为由25％匀速增加到30％；

21～25min，所述流动相A的体积百分含量由70％匀速降低到5％，所述流动相B的体积百分含量为由30％匀速增加到95％；

25～29min，所述流动相A的体积百分含量为5％，所述流动相B的体积百分含量为95％；

39～30min，所述流动相A的体积百分含量由5％匀速增加到98％，所述流动相B的体积百分含量由95％匀速降低到2％；

所述高效液相色谱-质谱法的质谱条件为：

离子源：ESI离子源；

离子源温度：150℃；

扫描方式：正负离子扫描；

扫描范围：50～1200Da；

载气：氮气；

脱溶剂气：氮气；

脱溶剂气温度：450℃；

脱溶剂气流量：800L/h；

锥孔气流量：50L/h；

锥孔电压：40V；

毛细管电压：1000V；

碰撞诱导解离气体：氩气；

低碰撞能量：6eV；

高碰撞能：15～45eV。

2.根据权利要求1所述的的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述补肾活血方的中药组分和水的质量比为1：(7～9)。

3.根据权利要求1所述的的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述浸泡的时间为8～12h。

4.根据权利要求1所述的的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述回流提取的温度为90～100℃，时间为1.5～3h。

5.根据权利要求1所述的的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙醇萃取时加入乙醇后乙醇的体积分数为65～75％。

6.根据权利要求1或5所述的的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述静置的温度为3～5℃，时间为23～25h。

7.根据权利要求1所述的的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述水萃取液和乙酸乙酯的体积比为1：(6～8)。

8.根据权利要求1所述的的检测方法，其特征在于，步骤(4)中，所述第一水相和正丁醇的体积比为1：(6～8)。