[发明专利]一种补肾活血方化学成分的检测方法

说明书

本发明提供了一种补肾活血方化学成分的检测方法，涉及中药检测技术领域。本发明提供的检测方法，包括以下步骤：将补肾活血方的中药依次进行水浸泡、提取、浓缩、乙醇萃取、静置、离心分离、除去上清液中的乙醇、乙酸乙酯萃取、将所得水相进行正丁醇萃取、浓缩所得水相，得到待测液，然后采用特定的检测条件进行UPLC‑MS检测，将所得检测结果对照标准色谱图和天然产物数据库，得到待测液中的化学成分。本发明提供的检测方法能够同时定性检测出补肾活血方中的93种有效化学成分，操作简单，为补肾活血方的药用机理以及中药单体治疗下腰痛奠定了基础。

技术领域

本发明涉及中药检测技术领域，具体涉及一种补肾活血方化学成分的检测方法。

背景技术

下腰痛是临床常见病、多发病，其治疗主要以手术和非甾体抗炎西药为主，其中，手术治疗易 发生创口感染、神经损伤、硬膜外血肿等风险，非甾体抗炎西药可产生消化道出血等副作用，且这两种治疗方案价格昂贵。

中药治疗能够解决上述手术风险高、西药副作用大、价格昂贵等问题。例如，展嘉文(展嘉文等.补肾活血方含药血清对离体兔脊柱运动节段压力退变模型的影响.中国骨伤,2018,31(7):627-634.)和朱立国(朱立国等.补肾活血方治疗椎间盘源性腰痛的临床观察.世界中医药,2017,12(3):554-557.) 公开了一种补肾活血方，由杜仲、补骨脂、怀牛膝、丹参、威灵仙和木瓜组成，其中，杜仲15g、补骨脂10g、怀牛膝10g、丹参12g、威灵仙10g和木瓜9g，具有补肾强腰、活血化瘀之功效，该补肾活血方治疗下腰痛总有效率为90.69％，并可有效改善患者VAS及ODI评分。

但目前对上述补肾活血方的药用机理或其主要成分的研究尚不足。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种补肾活血方化学成分的检测方法，本发明提供的检测方法能够检测出补肾活血方中的主成分，操作简单。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种补肾活血方化学成分的检测方法，包括以下步骤：

(1)将补肾活血方的中药置于水中浸泡后回流提取，得到水提取液；所述补肾活血方的中药组分为杜仲、补骨脂、怀牛膝、丹参、威灵仙和木瓜；

(2)将所述水提取液依次进行浓缩、乙醇萃取、静置和离心分离，得到乙醇水上清液；除去所述乙醇水上清液中的乙醇，得到水萃取液；

(3)采用乙酸乙酯萃取所述水萃取液，得到第一水相；

(4)采用正丁醇萃取所述第一水相，得到第二水相；浓缩所述第二水相，得到待测液；

(5)采用高效液相色谱-质谱法对所述待测液进行检测，将所得检测结果对照标准色谱图和天然产物数据库，得到待测液中的化学成分；

所述高效液相色谱-质谱法的高效液相色谱检测条件为：

色谱柱：C₁₈色谱柱；

柱温：30℃；

洗脱方式：梯度洗脱，流动相A为0.1v/v％甲酸水溶液，流动相B为 0.1v/v％甲酸乙腈溶液；所述流动相A和流动相B的流速为0.3mL/min；

检测波长：190～500nm；

所述梯度洗脱的程序如下：

0～2min，所述流动相A的体积百分含量为98％，所述流动相B的体积百分含量为2％；

2～7min，所述流动相A的体积百分含量由98％匀速降低到85％，所述流动相B的体积百分含量为由2％匀速增加到15％；