[发明专利]一种毒品原植物恰特草及其制品实时荧光PCR检测引物、探针、方法和试剂盒

权利要求书

1.一种恰特草及其制品实时荧光PCR检测引物组，其特征在于，包括检测引物和检测探针，所述的检测引物如下所示：

Catha134 -F：5'-AGGTGTGATAAAAATGAGTCCCAGTA-3'；

Catha134-R：5'-TTTGGCGAGGGACTGAATAATC-3'；

所述的检测探针如下所示：

Catha134-P：5'-CTTTGACAAAAACCCTTAAA-3'，探针的5'端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的检测引物组，其特征在于，所述的荧光报告基团为FAM，所述的荧光淬灭基团为MGB。

3.一种恰特草及其制品实时荧光PCR检测试剂盒，包括实时荧光定量PCR反应液、耐热DNA聚合酶、检测引物和检测探针，其特征在于，所述的检测引物如下所示：

Catha134 -F：5'-AGGTGTGATAAAAATGAGTCCCAGTA-3'；

Catha134-R：5'-TTTGGCGAGGGACTGAATAATC-3'；

所述的检测探针如下所示：

Catha134-P：5'-CTTTGACAAAAACCCTTAAA-3'，探针的5'端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。

4.一种恰特草及其制品实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取样品的基因组DNA作为模板；

（2）加入权利要求1所述的检测引物和检测探针，与实时荧光定量PCR反应液及耐热DNA聚合酶混合形成扩增反应体系；

（3）将扩增反应体系在荧光PCR仪上进行实时荧光PCR反应，反应结束后，根据扩增曲线判断样品是否为恰特草或其制品。

5. 根据权利要求4所述的恰特草及其制品实时荧光PCR检测方法，其特征在于，所述的步骤（2）的扩增反应体系为：25 μL，包括Premix Ex Taq 12.5 μL，ROX Reference Dye II0.3 μL，10 μmol/L 检测引物Catha134-F和Catha134-R各0.25 μL，10 μmol/L 检测探针Catha134-P 0.25 μL，DNA 模板2 μL和ddH₂O 9.45 μL。

6. 根据权利要求4所述的恰特草及其制品实时荧光PCR检测方法，其特征在于，所述的步骤（3）的实时荧光PCR反应，其反应程序为95℃ 30 s；95℃ 5 s、60℃ 34 s，40个循环，于60℃收集荧光信号。

7.根据权利要求4所述的恰特草及其制品实时荧光PCR检测方法，其特征在于，所述的步骤（3）的根据扩增曲线判断样品是否为恰特草或其制品的标准为：在阳性对照、阴性对照和空白对照结果均正常的情况下，被检样品进行检测时：如果有典型荧光扩增曲线，Ct值≤38.0，则判定样品为恰特草或其制品；如果Ct值＞38.0或无Ct值，则判定样品不是恰特草或其制品。

8.权利要求1所述的检测引物组在制备检测恰特草及其制品的试剂盒中的应用。

9.权利要求3所述的检测试剂盒在鉴别恰特草及其制品中的应用。