[发明专利]一种斑马鱼铁死亡模型的构建方法在审
| 申请号： | 202011098946.8 | 申请日： | 2020-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN112226405A | 公开（公告）日： | 2021-01-15 |
| 发明（设计）人： | 王明勇;徐又佳;曹子厚 | 申请（专利权）人： | 苏州木芮生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理有限公司 11369 | 代理人： | 杨胜 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 斑马 死亡 模型 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种斑马鱼铁死亡模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)斑马鱼的繁殖：将性成熟的斑马鱼按雌雄比＝1:2的比例放入交配鱼缸内，插上隔板，雌雄斑马鱼分开；隔夜后开灯换水，取出隔板，待30-60分钟后收集鱼卵；收集到的鱼卵置于含E3的培养皿中，挑选受精鱼卵，按100枚/盘的密度进行分盘，加入胚胎培养液，28℃恒温孵育5小时；
2)铁死亡模型的构建：挑选步骤1)中孵育正常的斑马鱼，按10-20条/孔的密度分布于6孔板中，加入E3培养液，28℃恒温孵育24h；除去E3培养液，将6孔板中的受精卵随机分为DMSO阴性对照组、Erastin处理组和枸橼酸铁铵处理组，分别向其中加入DMSO、Erastin溶液和枸橼酸铁铵溶液，恒温培养48h；
3)铁死亡模型的验证：使用台盼蓝对所述DMSO阴性对照组、Erastin处理组和枸橼酸铁铵处理组的斑马鱼进行活体染色，检测到细胞死亡现象，即得到斑马鱼铁死亡模型。
2.如权利要求1所述的斑马鱼铁死亡模型的构建方法，其特征在于，所述Erastin溶液的浓度为20μmol/L，枸橼酸铁铵溶液的浓度为200μg/ml。
3.如权利要求1所述的斑马鱼铁死亡模型的构建方法，其特征在于，所述步骤2)中，恒温培养的条件为28℃、避光处理。
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