[发明专利]一种蛹虫草子实体碱提杂聚多糖及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种蛹虫草子实体碱提杂聚多糖及其制备方法和应用，首次公开一种结构新颖的蛹虫草子实体碱提杂聚多糖，采用碱法提取杂聚多糖，此杂聚多糖可用于制备药物用于降低血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，提升血浆脂蛋白酯酶的活性，并提升肝X受体α（LXRα）的表达。

技术领域

本发明涉及一种生物活性物质及其制备方法和用途，具体是指蛹虫草子实体中一种碱提杂聚多糖及其制备方法和降脂的应用。

背景技术

目前，心脑血管疾病是一种病发率和病死率高于肿瘤的疾病，是威胁人类健康的头号疾病。其主要病理过程是在血管壁病变的基础上，变性的低密度脂蛋白(LDL)等成分在血管内膜下逐渐沉积，造成缺血性或出血性疾病。动脉粥样硬化是心血管疾病的基础病变。

高脂血症是诱发动脉粥样硬化的主要因素之一。当体内胆固醇过高，特别是低密度脂蛋白水平（LDL-C）以及甘油三酯增高时，氧化的LDL则可被巨噬细胞吞噬，进而沉积在动脉内皮下，引起内皮下变性，进而导致血小板在动脉内壁聚集，若同时伴有动脉壁损伤或胆固醇转运障碍，则易在动脉内膜形成脂斑，最后，血管壁隆起、向管腔内突起形成粥样斑块。

脂蛋白脂酶（LPL）是脂质代谢的关键酶，其由肝外实质细胞合成分泌入血，水解乳糜微粒（CM）以及极低密度脂蛋白（VLDL）上的甘油三酯（TG）；LPL缺乏会引起CM和VLDL水平增高。肝X受体α（LXRα）激活后，可介导下游的ATP-结合盒转运子的表达，进而促进胆固醇及其代谢物外排。

蛹虫草（Cordyceps militaris L. Link）又名北虫草、北冬虫夏草，其易于人工培养，已成为商业化的产品。蛹虫草多糖是蛹虫草含量较高的生物活性物质之一，且具有多种生物学活性，例如：增强免疫、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、降血糖等多种功能。从蛹虫草中制备多糖，并确定其生物学活性，可以促进蛹虫草多糖的临床转化应用和经济附加值的提升，对蛹虫草的综合利用具有重要意义。

目前，文献报道的蛹虫草多糖多采用水提醇沉法，但醇沉法获得多糖的方法虽然工艺流程简单，但获得的多糖相对分子质量范围广，组成成分复杂，既不利于多糖构-效关系的阐述，也不利于产品质量控制和后续临床转化应用。

近年来，先后有国内外研究者报道了蛹虫草提取液单独或联合用药的降脂和抗动脉粥样硬化效果，也有关于水提蛹虫草多糖的提取文献报道；但蛹虫草子实体碱提多糖的文献报道少见，而其中具有抗动脉粥样硬化和降脂功能的碱提多糖的结构和制备方法未见报道。

发明内容

本发明针对以上不足之处，提供了一种蛹虫草子实体碱提杂聚多糖的系统分离方法及其应用，此杂聚多糖可用于制备药物用于降低血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，提升血浆脂蛋白酯酶的活性，并提升肝X受体α（LXRα）的表达。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种蛹虫草子实体碱提杂聚多糖的提取方法，包括以下步骤：

1）制备蛹虫草子实体碱提粗多糖：采集蛹虫草子实体，阴干并粉碎破壁；破壁后的蛹虫草子实体加入95%的乙醇回流浸提脱脂，过滤得固形物；向固形物中再加入蒸馏水提取三次，离心得残渣；残渣加入碱水液提取，采用酸中和，过滤或离心获得上清液，减压浓缩后加入95%的乙醇，置于0～4℃过夜，离心，收集沉淀；收集的沉淀经真空冷冻干燥，即得蛹虫草子实体碱提粗多糖。

2) 蛹虫草子实体碱提多糖的纯化：蛹虫草子实体碱提粗多糖经阴离子交换柱采用0~2 mol/L的氯化钠洗脱和凝胶渗透色谱柱分离纯化，即可分离得到纯的蛹虫草子实体杂聚多糖，命名为CM3-W。

获得的CM3-W，采用凝胶色谱法测定其分子量，其特征为该多糖分子量为19.1kDa；CM3-W由葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成；各糖苷键的构成比例由甲基化分析结果和核磁共振波谱（NMR）数据确定。NMR如附图1-5所示，数据归属如表格1所示。