[发明专利]白细胞介素-6的检测试剂、试纸、试剂盒及其应用

说明书

本申请公开了一种白细胞介素‑6的检测试剂、试纸、试剂盒及其应用。具体地，白细胞介素‑6的检测试剂包含标记有白细胞介素‑6抗体的羧基修饰时间分辨荧光微球；且羧基修饰时间分辨荧光微球通过链霉亲和素和生物素被白细胞介素‑6抗体标记。本发明还公开了包含该检测试剂的检测试纸和试剂盒，以及其应用方法。该检测试剂基于荧光免疫层析法开发，使得使用该检测试剂检测白细胞介素‑6时操作简单、灵敏度高、选择性强、准确度高。

技术领域

本发明实施例涉及激素检测领域，具体涉及一种白细胞介素-6的检测试剂、试纸、试剂盒及其应用。

背景技术

白细胞介素-6，简称白细胞介素-6(白细胞介素-6)，是一种细胞因子，属于白细胞介素的一种，主要由巨噬细胞、单核细胞、成纤维细胞、淋巴细胞以及T细胞等多种细胞产生。白细胞介素-6能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能。开发能够快速、特异的检测血液中的白细胞介素-6的含量对多种疾病的早期诊断、治疗以及预后具有重要作用。目前，白细胞介素-6的检测主要方法为化学发光法和酶联免疫法。

专利CN104330551A公布了一种基于化学发光法的免疫荧光定量检测白细胞介素-6的试剂盒，以异硫氰酸荧光素标记的白细胞介素-6包被抗体和碱性磷酸酶标记的白细胞介素-6标记抗体制备抗试剂，以抗异硫氰酸荧光素抗体偶联羧基磁珠制得磁微粒试剂，双夹心法结合白细胞介素-6，以新型化学发光底物ALPS为底物，用化学发光仪检测发光强度进行定量。然而该试剂盒的制备步骤较复杂，需要成本较高，检测时需要水浴、分离等过程，操作多，耗时长。

专利CN103969438A公布了一种采用定量夹心酶联免疫方法来检测白细胞介素-6。然而该方法检测步骤有酶标板的包被及封闭、标准品或被检血清的处理、单克隆抗体检测、检测过程中孵化时间长、洗板次数多，需要配套设备和专业人员。

本发明人通过研究发现现有技术中：化学发光法和酶联免疫法均检测步骤多耗费时间较长。荧光免疫层析法是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术，可根据荧光强度对物质进行定性定量分析，具有操作简单、灵敏度高、选择性强、准确度高等优点。因此，本领域有必要尝试开发基于荧光免疫层析法的白细胞介素-6检测试剂。

发明内容

本发明实施方式的目的在于提供一种白细胞介素-6的检测试剂，该检测试剂基于荧光免疫层析法开发，使得使用该检测试剂检测白细胞介素-6时操作简单、灵敏度高、选择性强、准确度高。

为解决上述技术问题，本发明的第一方面提供了一种白细胞介素-6的检测试剂，所述白细胞介素-6的检测试剂包含标记有白细胞介素-6抗体的羧基修饰时间分辨荧光微球；所述羧基修饰时间分辨荧光微球通过链霉亲和素和生物素被白细胞介素-6抗体标记。

本发明实施方式相对于现有技术而言，白细胞介素-6的检测试剂基于荧光免疫层析法开发，利用时间分辨荧光微球的具有极宽的stoke位移、极长的荧光猝灭时间和长荧光半衰期的稀土离子做标记物的优势，可消除基质干扰和降低背景干扰，有效提升检测灵敏度，利用偶连白细胞介素-6抗体特异性抗体的羧基修饰时间分辨荧光微球，提高了标记物的稳定性，此外利用羧基修饰时间分辨荧光微球与链霉亲和素做修饰手臂，更易与生物素化的抗体结合，由于链霉亲和素上含有四个相同的可结合生物素的肽链，放大终反应，提高了灵敏度；这种结合的亲和常数百万倍于一般抗原抗体反应，故使用本发明的白细胞介素-6的检测试剂测定白细胞介素-6的准确度和重复性得以提高；此外，这种结合具有高度的专一性，使得使用本发明的白细胞介素-6的检测试剂检测白细胞介素-6的选择性得以提升。此外，使用本发明的白细胞介素-6检测试剂检测白细胞介素-6无须进行检测时需要水浴、分离等过程，也无须进行检测孵化、洗板和分离等过程，只需将样品稀释后滴入加样孔，减少了处理步骤，操作更简单。

本发明中的羧基修饰的时间分辨荧光微球采用稀土离子作为标记物，优选地，采用具有较长荧光半衰期的稀土离子作为标记物，例如：Eu³⁺、Sm³⁺等。