[发明专利]一种评价脓毒症的生物标志物的筛选方法

说明书

本发明属于生物标记物技术领域，公开了一种评价脓毒症的生物标志物的筛选方法，包括：进行血清样品中RNA的提取得到RNA样本；将RNA样本反转录合成cDNA，标记cRNA的合成、纯化，并进行cRNA片段化；将片段化的cRNA与芯片进行杂交，芯片扫描，得到评价脓毒症的生物标志物；对生物标志物的诊断价值进行验证。本发明通过脓毒症患者血清样本进行检测和分析，初步筛选得到血清标志物，并进行血清标志物的再次筛选，得到的标志物的诊断价值更高，能够提高脓毒症的早期预警的敏感性和特异性，预测脓毒症的病情进展，为临床早期干预提供参考依据，最终降低脓毒症的死亡率，具有良好的可重复性，适用于脓毒症诊断标志物的检测。

技术领域

本发明属于生物标记物技术领域，尤其涉及一种评价脓毒症的生物标志物的筛选方法。

背景技术

目前，脓毒症是由于免疫系统对于侵袭性感染的应答而成为一种异质性综合征。当伴随器官系统性功能紊乱或心血管性休克，会出现严重的脓毒症或脓毒症性休克，这是严重病患发病率和死亡率的主要原因。报道显示，脓毒症是非冠脉ICU病患最主要的死因。脓毒症是缺乏可靠的诊断标准的异质性疾病，由于血培养的阳性率较低，许多病例的诊断依赖于相对主观的临床环境，导致诊断出现变异性，诊断和启动治疗仍需要通过评估病史，感染症状及进展为急性器官衰竭可能性。生物标志物能帮助缩短这一过程，有提高脓毒症诊断和治疗的潜在价值。但是目前评价脓毒症的生物标志物的筛选的方法复杂，并且生物标记物的灵敏度低，在临床中诊断价值较小。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前评价脓毒症的生物标志物的筛选的方法复杂，并且生物标记物的灵敏度低，在临床中诊断价值较小。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种评价脓毒症的生物标志物的筛选方法。

本发明是这样实现的，一种评价脓毒症的生物标志物的筛选方法，所述评价脓毒症的生物标志物的筛选方法包括以下步骤：

步骤一，抽取确诊为脓毒症且无其他免疫疾病的患者的静脉血，将静脉血置于离心管中；将盛有静脉血的离心管置于离心机内离心；

步骤二，将离心管置于恒温水浴箱内，设定水浴温度为37℃，静置4～5min；使用玻璃小滴棒将纤维蛋白剥离到离心管的管壁上，同时将离心管再次置于离心机中进行二次离心；

步骤三，取1ml血清样本置于离心管中，加入2mlTrizolReagent，振荡使二者融合，静置后进行剧烈振荡至离心管内无沉淀物；

步骤四，在离心管内加入1ml氯仿，振荡使二者融合，静置直至出现分层；将分层液体置于离心机中，设定离心温度为4℃、离心转速为6000～8000r/min进行10～12min离心，弃除上清液；

步骤五，在离心管中加入3ml乙醇，振荡后将离心管置于离心机内，设定离心温度为4℃，离心转速为8000～10000r/min进行3～5min离心，弃除上清液；对离心管内的液体进行干燥，至离心管内无液体残留；

步骤六，在离心管中加入RNase水，在55～60℃环境内孵育10～15min，进行血清样品中RNA的提取，得到RNA样本；

步骤七，检测RNA样本的RNA纯度，将检测结果与预设纯度进行对比，并将符合纯度要求的样本置于冰箱中在-80℃环境下进行保存；

步骤八，将步骤七保存的RNA样本取出，将RNA样本反转录合成cDNA，进行标记cRNA的合成；

步骤九，将步骤八得到的合成的cRNA溶于结合缓冲液中，并加入蛋白酶抑制剂，以超声破碎仪震破细胞，于4℃环境下离心15～20min，移除细胞碎片，过滤上清液；

步骤十，将步骤九过滤后的上清液注入已事先通过结合缓冲液的金属螯合层析管柱，清洗缓冲液清洗管柱，以冲洗缓冲液冲洗，得到纯化物，并进行cRNA片段化；