[发明专利]生物样本中类固醇激素的检测方法及该方法所用试剂盒

权利要求书

1.生物样本中类固醇激素的检测方法，其特征在于，包括：

a)纯化和富集所述生物样本中的类固醇组分；

b)以分子量低于100的羟胺为衍生化试剂对所述类固醇组分进行衍生化处理；

所述羟胺的浓度为200mM～400mM、反应温度为50℃～70℃，反应时间为40min～80min；

c)使用SPE色谱柱对衍生化处理后单组分进行纯化；

d)使用MALDI-MS对类固醇激素进行检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述羟胺为盐酸羟胺。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中，富集的方法为甲醇沉淀蛋白法。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述SPE色谱柱为包含N-乙烯基吡咯烷酮和二乙烯基苯活性基团的Oasis HLB色谱柱或反相分离色谱柱。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤c)具体包括：

用甲醇活化SPE色谱柱，柱平衡后上样，用3v/v％～7v/v％的甲醇水溶液洗涤，用甲醇洗脱；

收集洗脱液并将其中的固相溶解于40v/v％～60v/v％的甲醇水溶液中。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述类固醇激素包括雌酮、睾酮和孕酮中的至少一种。

7.根据权利要求1～6任一项所述的方法，其特征在于，所述检测为通过内标法进行定量检测，采用的内标为同位素标记的所述类固醇激素的类似物。

8.根据权利要7所述的方法，其特征在于，所述内标在步骤a)或b)之前加入所述生物样本或标准品溶液。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在步骤d)中，根据激素标准品和内标的MS信噪比比值和所添加激素的浓度，绘制得到标准曲线，计算出所述生物样本中所述类固醇激素的浓度。

10.根据权利要求1～6、8～9任一项所述的方法，其特征在于，所述生物样本为血液类样本。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述血液类样本包括干血斑、血液、血清或血浆。

12.生物样本类固醇激素的检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1～11任一项中所定义的挥发性羟胺以及SPE色谱柱。

13.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含选自i)～iii)的组分：

i)从生物类样品中进行类固醇提取和/或纯化所需试剂；

ii)SPE色谱柱纯化所需的柱活化柱、柱平衡液、柱洗涤液、柱洗脱液中的至少一种；

iii)同位素标记的所述类固醇激素的类似物。