[发明专利]黄曲霉毒素污染发生前的早期预警方法

权利要求书

1.黄曲霉毒素污染发生前的早期预警方法，其特征在于：步骤如下：称取定量样品，进行样品毒素提取，获得样品提取液，将样品提取液进行液相色谱-高分辨质谱仪检测分析，收集质谱信息，根据质谱信息进行定性分析，获得versiconol(VOH),杂色曲菌素Bversicolorin B(Ver B),5-甲基杂色曲霉素5-methoxysterigmatocystin(5-MST)、预警分子A和预警分子B的定性结果，并依据其对应色谱峰面积，并结合内标，基于各预警分子的色谱峰面积/内标峰面积-预警分子浓度的标准曲线进行定量分析获得这些预警分子定量结果；

所示的定性分析是通过测定样品中预警分子的一级质谱和二级质谱信息，根据预警分子的一级质谱精确质量数与其理论值比较，质谱偏差在5ppm内，然后结合二级质谱信息，通过比对主要二级质谱特征离子峰进行定性分析；

各预警分子的一级质谱峰信息如下：

所述预警分子A的主要特征二级质谱峰包括：335.05045Da，320.02655Da，291.0243Da；

预警分子B的主要特征二级质谱峰包括362.03836Da,333.0355Da，319.0204Da；

输入黄曲霉菌产毒菌株预警分子的定量结果，基于分类预测模型输出风险评估结果来对样品黄曲霉毒素污染风险进行评估；

所述的分类预测模型为基于预警分子A的含量为变量，以化学计量学方法建模得到；

或为基于预警分子B的含量为变量，以化学计量学方法建模得到；

或为基于预警分子A和预警分子B中的一种以上与versiconol(VOH)，杂色曲菌素Bversicolorin B(Ver B)和5-甲基杂色曲霉素5-methoxysterigmatocystin(5-MST)中的一种以上预警分子的含量为变量，以化学计量学方法建模得到。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的化学计量学方法为层级聚类分析、最小偏二乘正交投影、随机森林多元变量统计分析方法。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对样品进行培养3-4天后，取样进行产毒黄曲霉菌预警分子的检测，直接将预警分子versiconol(VOH),杂色曲菌素Bversicolorin B(Ver B),5-甲基杂色曲霉素5-methoxysterigmatocystin(5-MST),预警分子A和预警分子B的定量值输入到分类预测模型预测黄曲霉毒素风险。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：包括疑似样品筛查，对筛选到的疑似样品进行样品前处理，检测产毒曲霉预警分子，基于分类预测模型输出风险评估结果来对样品黄曲霉毒素污染风险进行风险评估，具体为：检测样品的黄曲霉毒素含量，将黄曲霉毒素未检出或黄曲霉毒素含量未超标样品进行微生物代谢加速培养实验，疑似污染样品将长出曲霉，疑似样品液氮淬灭研磨备用，对样品进行黄曲霉毒素含量检测，黄曲霉毒素高于国家限量标准的样品直接认定为高风险样品即疑似样品。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的样品为农产品或食品。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：提取黄曲霉菌产毒菌株预警分子为：使用甲醇：乙腈：水的体积比为2-4：2-4：0-1的溶液进行一次提取，然后使用甲醇：二氯甲烷：乙酸乙酯的体积比为1-3：1-2：1-2的溶液进行二次提取来提取黄曲霉菌产毒菌株预警分子，然后高速离心获得样品提取液。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的样品分析方法为：将前述样品进行液相色谱-高分辨质谱仪检测分析。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述液相色谱-高分辨质谱仪检测分析中：色谱柱为C₁₈反相 色谱柱，质谱分析采集模式分为正离子模式和负离子模式分开运行；采集模式为数据依赖采集模式,同时采集到一级质谱数据和二级碎片离子数据，进行定性定量分析，得到预警分子的分析结果。