[发明专利]黄曲霉毒素污染发生前的早期预警方法

说明书

本发明涉及黄曲霉毒素污染发生前的早期预警方法。步骤如下：称取定量样品，进行样品毒素提取，获得样品提取液，将样品提取液进行液相色谱‑高分辨质谱仪检测分析，收集质谱信息，根据质谱信息进行定性分析，获得定性结果，并依据其对应色谱峰面积，并结合内标，基于各预警分子的色谱峰面积/内标峰面积‑预警分子浓度的标准曲线进行定量分析获得这些预警分子定量结果；利用基于以上预警分子的含量为变量，以化学计量学方法建模得到的分类预测模型，输入黄曲霉菌产毒菌株预警分子的定量结果，基于分类预测模型输出风险评估结果来对样品黄曲霉毒素污染风险进行评估。实现黄曲霉毒素污染发生前的早期预警。

技术领域

本发明涉及黄曲霉毒素污染发生前的早期预警方法，属于分析检测领域。

背景技术

真菌毒素是一种由丝状真菌产生的次生代谢产物，可在全产业链上污染花生，玉米，棉花，坚果等作物。它们不仅在全球范围内发生率很高，造成全球每年25％的作物受真菌毒素污染而造成巨大的经济损失，同时严重危害人民生命健康。例如它们具有致癌性，免疫抑制性，肝毒性，肾毒性以及神经毒性等属性。黄曲霉毒素主要有黄曲霉菌产生，它被认为是全世界十大最恐怖的真菌之一。这种真菌在世界广泛分布，包括中国，是导致中国地区性肝癌的重要诱因。目前，许多国家设置了严格的黄曲霉毒素限量标准，以保障农产品质量安全和避免因此而产生贸易壁垒。很显然，开发黄曲霉毒素早期预警方法变得迫在眉睫。

黄曲霉毒素污染风险主要分为产毒黄曲霉菌和黄曲霉毒素的污染。

本发明中，为了实现黄曲霉毒素污染风险预警，我们提出两个策略：(1)开发产毒黄曲霉菌生物预警分子来早期鉴定花生或土壤中黄曲霉菌的产毒力从而对黄曲霉毒素污染进行早期预警。(2)通过动态监测产毒力相关的预警分子来预测黄曲霉毒素污染严重程度。众所周知，真菌已经演化成千上万的次生代谢物为化学武器或盔甲使其占据有利的生态位和保护它们的食物免受竞争者的争夺。理论上，这些多样性为本研究在亚种水平筛选产毒黄曲霉菌的生物预警分子在理论上铺平了道路。这里我们提出系统调查黄曲霉群体代谢多样性属性并结合机器学习技术筛选可有效区分高低产毒力菌株的预警分子，同时根据预警分子的动态变化预测农产品中黄曲霉毒素污染的严重程度。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有黄曲霉毒素污染发生前预警缺乏而提供基于黄曲霉毒素产毒菌株预警分子进行黄曲霉毒素污染发生前的早期预警方法。

本发明为解决上述技术问题，所采用的技术方案为：

黄曲霉毒素污染发生前的早期预警方法，步骤如下：

称取定量样品，进行样品毒素提取，获得样品提取液，将样品提取液进行液相色谱-高分辨质谱仪检测分析，收集质谱信息，根据质谱信息进行定性分析，获得versiconol(VOH),杂色曲菌素B versicolorin B(Ver B),5-甲基杂色曲霉素5-methoxysterigmatocystin(5-MST)、预警分子A和预警分子B的定性结果，并依据其对应色谱峰面积，并结合内标，基于各预警分子的色谱峰面积/内标峰面积-预警分子浓度的标准曲线进行定量分析获得这些预警分子定量结果，

所示的定性分析是通过测定样品中预警分子的一级质谱和二级质谱信息，根据预警分子的一级质谱精确质量数与其理论值比较，质谱偏差在5ppm内，然后结合二级质谱信息，通过比对主要二级质谱特征离子峰进行定性分析；

各预警分子的一级质谱峰信息如下：

所述预警分子A的主要特征二级质谱峰包括：335.05045Da，320.02655Da，291.0243Da；

预警分子B的主要特征二级质谱峰包括362.03836Da,333.0355Da，319.0204Da。

各预警分子的质谱图见图11；