[发明专利]重组人源化胶原蛋白及其产业化制备方法与产品应用

权利要求书

1.一种人源化胶原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种人源化胶原蛋白，其氨基酸序列由3-25个核心单元进行重复串联形成，所述核心单元的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.如权利要求2所述的人源化胶原蛋白，其氨基酸序列由10-20个核心单元进行重复串联形成，所述核心单元的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4.如权利要求2所述的人源化胶原蛋白，其氨基酸序列由10-15个核心单元进行重复串联形成，所述核心单元的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

5.一种用于携带和表达如权利要求1至4中任一项的人源化胶原蛋白基因的表达载体或菌株，所述载体为pET载体，所述菌株为大肠杆菌BL21（DE3）。

6.一种表达人源化胶原蛋白的方法，该方法包括：发酵种子活化、发酵种子液制备、发酵,所述的发酵包括如下步骤：

将如权利要求5所述菌株的种子液按照1-10%的接种量接入到含灭菌后的分批发酵培养基发酵罐中；

设定发酵温度为37℃、pH为6.8-7.2之间、DO设定在30-45%之间；

发酵开始后定期取样进行OD600和菌体湿重的测定，待OD600达到30左右时，开始进行补料培养；

待菌体生长至0D600≈20-55之间向发酵罐中加入终浓度为0.2-1.0mM的IPTG进行诱导表达；诱导表达4-6h结束培养。

7.一种纯化人源化胶原蛋白的方法，该方法包括：将如权利要求6所述方法制备得到的发酵菌体使用TE缓冲液，即20mM Tris HCl 1mM EDTA pH8.0,重悬至100-150g/L→悬浮物使用高压均质机裂解，离心收集裂解物上清，上清过滤去除不溶物杂质→上清中加入终浓度为30-150mM硫酸锰，搅拌均匀后离心收集上清→上一步硫酸锰处理后上清使用柠檬酸调节pH至4.5，搅拌均匀后离心收集上清，上清过滤→将pH处理后上清加入硫酸铵颗粒盐析至终浓度达到0.8-1.2M，离心收集盐析沉淀→盐析沉淀使用纯化水溶解,1L水对1kg初始湿菌体,2h以上，离心收集上清并过滤除去颗粒或絮状杂质，将该上清放入到0-8℃内维持12h以上，此时蛋白析出，低温离心收集沉淀即可获得粗品， 将rHLC粗品使用pH6.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液溶解至浓度1-50mg/ml，过滤去除杂质获得粗品溶液→将粗纯液使用SP FF纯化。

8.如权利要求1至4中任一项的人源化胶原蛋白在制备功能性化妆品或医美类化妆品中的应用。