[发明专利]一种用于虾肉样本非靶向代谢组学和非靶向脂质组学研究的样品制备方法

说明书

本发明属于分析化学技术领域，公开了一种用于虾肉样本非靶向代谢组学和非靶向脂质组学研究的样品方法，取微量冻干的虾肉样本于预冻的提取溶液中，经均质及水浴超声后，离心取得上清液用于分析。采取溶液的溶剂添加策略同时使用三种极性差异较大的溶剂形成三溶剂单相系统同时提取亲水性及亲脂性化合物，并省略了两相提取方法中必需的相分离步骤，继而不需要两相提取方法中两相的分别收集和分析的步骤，实现了亲水性及亲脂性化合物在同一提取液且在同一次仪器分析过程中进行分析。明显改善了化合物覆盖，提高了样品通量，并避免了两相提取方法中部分化合物同时分布于两相和存在于界面的技术问题，及不同分析平台数据整合的步骤。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，更具体地，涉及一种用于虾肉样本非靶向代谢组学和非靶向脂质组学研究的样品制备方法。

背景技术

非靶向代谢组学和非靶向脂质组学已经广泛应用于在疾病诊断、发病机理、治疗方案、中药质量评价、食品真实性鉴别等研究领域。化合物的全面覆盖(提取及分析)是代谢组学及脂质组学的目标之一。即在进行非靶向代谢组学和非靶向脂质组学研究时，需要检测到尽可能多的化合物。同时进行非靶向代谢组学和非靶向脂质组学研究不仅可以改善化合物覆盖，而且鉴于亲水性化合物与亲脂性化合物的相关联性，非靶向代谢组学和非靶向脂质组学的整合更加有助于机制机理的发现。

目前，同时进行非靶向代谢组学及非靶向脂质组学研究的常规手段是，采用两相提取方法获得极性提取液(含亲水性化合物)和非极性提取液(含亲脂性化合物)，分别用于非靶向代谢组学和非靶向脂质组学研究。然而，以极性提取液和非极性提取液分别分析的方式实现非靶向代谢组学和非靶向脂质组学的同时研究显著增加了样品制备和仪器分析的时间成本，及经济成本。此外，在两相提取方法中，存在部分化合物同时分配于两相(极性提取液及非极性提取液)和分配至界面的现象，十分不利于非靶向代谢组学和非靶向脂质组学的整合。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有两相提取方法的缺陷和不足，提供一种可从同一样品一次性提取直接获得同时含亲水性及亲脂性化合物的提取液，继而可通过一次仪器分析同时研究非靶向代谢组学和非靶向脂质组学的提取方法。相比常用的极性提取液与非极性提取液分别分析的方法，本发明节约了样品制备及仪器分析时间，提高了样品通量；避免了两相提取方法中两相分离带来的部分化合物分别在两相分配或分配至界面的问题；不需要不同分析平台数据的整合。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种用于虾肉样本非靶向代谢组学和非靶向脂质组学研究的样品制备方法，采用三溶剂单相提取系统，对虾肉样本进行提取，获得同时含亲水性及亲脂性化合物的唯一单相提取液，进而经一次仪器分析进行非靶向代谢组学和非靶向脂质组学的同时研究。

因此，本发明首先提供了一种用于虾肉样本非靶向代谢组学和非靶向脂质组学研究的三溶剂单相提取系统，其特征在于，所述三溶剂单相提取系统是指三种提取溶剂构成的提取溶液提取虾肉样品，最终获得单相提取液的提取系统。

优选地，所述提取溶液包含甲基叔丁基醚、甲醇和水，体积比例为200:100:35。

优选地，所述提取溶液还包含2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)作为抗氧化剂，添加量为0.01％(w/v)。

优选地，所述提取溶液与虾肉样品按照50mg-120mg虾肉样品/1.2mL提取溶液的比例混合。

本发明还提供了一种用于虾肉样本非靶向代谢组学和非靶向脂质组学研究的样品处理方法，包括以下步骤：

S1、样品预处理：样品经冷冻干燥制成粉末；

S2、样品均质：将S1的粉末与提取溶液混合，均质；

S3、超声提取：对S2均质后所获提取混合物进行水浴超声，收集产生的单相提取液；

S4、过滤：将S3的单相提取液过滤后，备用。