[发明专利]一个呼吸道病原体的纳米孔测序建库的引物组合及其应用有效
| 申请号： | 202011110625.5 | 申请日： | 2020-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN112176032B | 公开（公告）日： | 2021-10-26 |
| 发明（设计）人： | 吴英松;陆才瑞;杨学习;李明;李贻林;欧阳国军;韩博炜 | 申请（专利权）人： | 广州市达瑞生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06;C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 段卉 |
| 地址： | 510160 广东省广州市黄埔区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一个 呼吸道 病原体 纳米 孔测序建库 引物 组合 及其 应用 | ||
1.一个基于呼吸道病原体的纳米孔测序建库的方法，其特征在于，所述呼吸道病原体为细菌和/或真菌，所述方法包括以下步骤：
S1.利用引物组合对样本进行第一次多重PCR，所述引物组合包括序列(1)到序列(5)，每条序列从5’端到3’端均由a段序列、b段序列和c段序列组成；
其中序列(1)到序列(5)的b段序列的一致，其序列的核苷酸如SEQ ID NO：1～108任一所示；
序列(1)到序列(5)的c段序列的核苷酸分别依次如SEQ ID NO：109～113所示；
序列(1)、序列(3)和序列(4)的a段序列为Oxford nanopore technology公司的SQK-PBK004试剂盒中条码引物中的正向引物的3’端的24个碱基的反向互补序列，核苷酸序列如SEQ ID NO：114所示；
序列(2)和序列(5)的a段序列为Oxford nanopore technology公司的SQK-PBK004试剂盒中条码引物中的反向引物的3’端的24个碱基的反向互补序列，核苷酸序列如SEQ ID NO：115所示；
S2.扩增产物中加入Oxford nanopore technology公司的SQK-PBK004试剂盒中的快速条码引物，进行第二次PCR；
S3.对扩增产物进行纯化，定量，连接测序接头，即得文库。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一次多重PCR的反应程序为：95℃，2分钟；95℃30秒，50℃30秒，72℃2分钟，30个循环；4℃，Hold。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二次PCR的反应程序为：95℃，2分钟；95℃30秒，62℃30秒，72℃2分钟，10个循环；72℃5分钟；4℃，Hold。
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