[发明专利]一种用于鉴别肺结节良恶性的血浆游离DNA甲基化基因组合及其应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴别肺结节良恶性的血浆游离DNA甲基化基因组合及其应用。一种用于鉴别肺结节良恶性的血浆游离DNA甲基化基因组合，选自SOX17、SCT、RASSF1A、SHOX2、HOXA7和CDO1中的至少任意两种。本发明所述的血浆游离DNA甲基化基因组合作为检测靶点在制备鉴别肺结节良恶性的试剂中的应用。本发明技术方案中，采用甲基化相对定量方法，主要以GAPDH为内参参照，并构建甲基化相对定量参考品，然后进行相对甲基化标准曲线的制作。通过标准曲线可得出肺恶性肿瘤相关基因的甲基化程度，相比于甲基化定量检测更加灵敏，提高了检测准确性，减少了假阳性率，对于肺部结节良恶性诊断更加有临床价值。

技术领域

本发明属于生物检测领域，涉及一种用于鉴别肺结节良恶性的血浆游离DNA甲基化基因组合及其应用。

背景技术

2011年美国国家肺癌筛查试验(National Lung Screening Trial，NLST)的随机对照研究结果显示， 与X线胸片相比，采用胸部低剂量CT对高危人群进行筛查可使肺癌的病死率下降20％，鉴于上述研究结果， 我国推荐肺癌高危人群应每年进行低剂量CT筛查，以早期诊断肺癌。但低剂量螺旋CT仅可识别肺结节， 但对肺结节良恶性鉴别诊断敏感性比较低，即高达96.4％的假阳性率，这给患者带来一些困扰。根据《中国 肺结节病诊断和治疗专家共识》结节病是一种病因及发病机制尚未明确的系统性肉芽肿性疾病，以中青年 发病为主，女性发病率略高于男性；不同地域及种族之间的发病率、临床表现迥异，瑞典的年发病率达160/10 万人，美国白种人的年发病率为49.8/10万人，非裔美国人为141/10万人，日本的年发病率约为1.01/10 万人，我国尚缺乏结节病的流行病学资料。典型的肺结节病表现为纵隔及对称性双肺门淋巴结肿大，伴或 不伴有肺内阴影；常伴有眼、皮肤病变，也可累及肝、脾、淋巴结、涎腺、心脏、神经系统、骨骼和肌肉 等组织和(或)器官。结节病的诊断主要依靠临床、影像和病理学资料进行综合判断。在受累部位组织活 检明确为非干酪样坏死性上皮样细胞肉芽肿的基础上，结合患者的临床、影像学表现，除外其他病因后可 确诊为结节病。不同结节病患者的受累组织和(或)器官、临床表现、治疗反应及预后都具有较大的异质 性，大多数患者预后良好，部分呈现自限性病程，约25％左右的患者表现为慢性、进展性病程，最终导致肺 纤维化、肝硬化、致死性心律失常、失明等不可逆病变，严重影响患者的生活质量和寿命。

目前推荐的肺结节鉴别诊断方法(1)Ⅰ、Ⅱ期结节病：需要与结核感染、淋巴增殖性疾病、IgG4相关性疾 病、恶性肿瘤等鉴别；(2)Ⅲ期结节病则需要与多种职业性肺病、肺结核等鉴别；(3)Ⅳ期结节病需要与 多种病因所致的肺纤维化鉴别，比如多种职业性肺纤维化、特发性肺纤维化、其他多种原因引起的继发性 肺纤维化等。

早期肺癌表现通常为肺结节，但肺结节既包含良性肿瘤也包含恶性肿瘤，所以对肺结节良恶性的鉴别， 对于肺癌早期发现具有非常重要的意义。目前肺结节良恶性鉴别诊断，主要依靠CT影像及组织病理活检， 依照医师主观经验判断及创伤大、患者不耐受等。其他还有肿瘤标志物的检测，包括癌胚抗原、甲胎蛋白、 糖类抗原125、糖类抗原199、神经元特异性烯醇化酶和细胞角蛋白21-1等。但目前肿瘤标志物单独检测 恶性结节的临床敏感性太低，无法满足临床需要，而多种肿瘤标志物的联合检测却可以提高肺结节早期诊 断的临床敏感性和准确率。鉴于肿瘤标志物对肺结节良恶性早期诊断的重要辅助作用，那么可以寻找一个 或多个高效的肿瘤指标来提高肺结节良恶性的判断率。