[发明专利]一种用于非小细胞肺癌标志物检测的阴极光电化学微流体生物传感器的制备方法

权利要求书

1.一种用于非小细胞肺癌标志物检测的阴极光电化学微流体生物传感器的制备方法，其特征在于，所述阴极光电化学微流体生物传感器的制备步骤如下：

（1）用计算机设计软件AUTOCAD设计和绘制微流控的通道图形；

（2）利用设计的图形绘制掩模，并且用标准的软光刻技术加工微流控聚二甲基硅氧烷PDMS芯片；

（3）将5 cm × 4 cm的ITO导电玻璃，依次用丙酮、乙醇和超纯水分别超声清洗30 min，氮气吹干，并将洗净的ITO导电玻璃依次进行刻蚀，Ag/AgCI浆料丝网印刷得到微工作电极1和微参比电极2的底板；

（4）将20 µL、5.0 ~ 10.0 mg/mL的铋镓氧Bi₂Ga₄O₉溶液滴涂在微工作电极上，室温下晾干，继续滴涂15 µL、4.0 ~ 8.0 mg/mL的碘化银AgI溶液，室温下晾干，再继续滴涂8 µL、8.0~ 10 mmol/L的巯基乙酸溶液，室温下晾干，滴加10 μL含1×10^-2 mol/L的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺EDC和2×10^-3 mol/L的N-羟基琥珀酰亚胺NHS的混合溶液以活化羧基，得到羧基化Bi₂Ga₄O₉/AgI修饰的微工作电极的底板；

（5）将上述步骤（2）中制备的微流控芯片和步骤（4）中Bi₂Ga₄O₉/AgI修饰的微工作电极底板一起进行氧气等离子体处理，然后将微流控芯片与底板键合，即完成微流体芯片制备；

（6）通过进样口5用注射泵以20 ~ 40 µL/min注射20 µg/mL的非小细胞肺癌标志物抗体Ab₁，到微流体芯片工作电极槽中Bi₂Ga₄O₉/AgI，4℃冰箱中孵育30 ~ 60 min，并且通过进样口5注射缓冲溶液进行洗涤，得到Bi₂Ga₄O₉/AgI/Ab₁；

（7）通过进样口6用注射泵以20 ~ 40 µL/min注射质量分数为0.1 ~ 1.0 %的牛血清蛋白BSA溶液到工作电极槽中Bi₂Ga₄O₉/AgI/Ab₁，以封闭电极表面上未结合Ab₁的非特异性活性位点，4℃冰箱中晾干，并且从进样口6注射缓冲溶液进行洗涤，得到Bi₂Ga₄O₉/AgI/Ab₁/BSA；

（8）通过进样口7用注射泵以20 ~ 40 µL/min注射10 pg/mL ~ 100 ng/mL不同浓度的非小细胞肺癌标志物Cyfra 21-1标准溶液到微工作电极Bi₂Ga₄O₉/AgI/Ab₁/BSA，4℃冰箱中孵育30 ~ 60 min，进样口7注射缓冲溶液进行洗涤，得到Bi₂Ga₄O₉/AgI/Ab₁/BSA/Cyfra 21-1；

（9）通过进样口8用注射泵以20 ~ 40 µL/min注射20 µL、1.0 ~ 4.0 mg/mL超氧化物歧化酶负载蜂窝锰氧化物的二抗标记物溶液SODs@hMnO₂-Ab₂到微工作电极Bi₂Ga₄O₉/AgI/Ab₁/BSA/Cyfra 21-1，4℃冰箱中孵育30 ~ 60 min，进样口8注射缓冲溶液进行洗涤，得到修饰完全的Bi₂Ga₄O₉/AgI/Ab₁/BSA/Cyfra 21-1/SODs@hMnO₂-Ab₂阴极光电化学微流体生物传感器，即一种用于非小细胞肺癌标志物检测的阴极光电化学微流体生物传感器的制备方法。