[发明专利]一种心肌肌钙蛋白I检测方法和试剂盒

说明书

本发明涉及一种心肌肌钙蛋白I检测方法和试剂盒，涉及蛋白检测领域。所述试剂盒包括用于检测心肌肌钙蛋白I的第一抗体和第二抗体，其中所述抗体选自如下抗体：第一抗体结合心肌肌钙蛋白I的第27‑40位氨基酸片段；第二抗体为结合心肌肌钙蛋白CTNI‑CTNC复合物的抗体。

技术领域

本发明涉及蛋白检测领域。具体而言，本发明涉及心肌肌钙蛋白I的检测方法和试剂盒。

背景技术

心肌肌钙蛋白I(cTnI:cardiac troponin I)的升高对诊断心肌损伤/坏死(myocardial necrosis)具有非常高的敏感性和特异性。目前cTnI已成为心梗的临床诊断，治疗，监测必不可少的标志物。

心肌肌钙蛋白在正常人微量存在，但在心肌梗死发生时，心肌细胞毁损造成cTnI释放入血，无论ST段是否抬高，cTnI都会急剧升高，在24小时左右达到高峰，7-10天后下降至正常水平。cTnI升高的幅度与心肌细胞坏死程度有一定程度的关联。如果病人血中cTnI在下降过程中再次升高，意味着心肌再次损伤/坏死。cTnI浓度的变化与ACS(AcuteCoronary Syndrome)危险程度、治疗决策和预后明确相关。

发明内容

发明人经过大量理论研究和实验摸索，充分考虑心肌肌钙蛋白I的结构特性，对各种待测肌钙蛋白抗原区间和检测抗体进行分析研究，并通过大量交叉实验和筛选，获得了能够用于心肌肌钙蛋白I检测的心肌肌钙蛋白I抗原区域组合。发明人已经证明结合特定抗原片段的抗体出乎意料的能够相互组合用于cTnI的高灵敏度检测。

在一些实施方案中，本发明可以包括下述一项或多项：

1.一种心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其包括用于检测心肌肌钙蛋白I的第一抗体和第二抗体，其中，第一抗体结合心肌肌钙蛋白I的第27-40位氨基酸片段；第二片段结合心肌肌钙蛋白CTNI-CTNC复合物。

2.项目1所述的试剂盒，第一抗体为标记抗体时第二抗体为包被抗体；或第二抗体为标记抗体时第一抗体为包被抗体。

3.项目1所述的试剂盒，进一步包括检测心肌肌钙蛋白I的第三抗体，所述第三抗体结合心肌肌钙蛋白I的第83-93位氨基酸片段；

例如用于配对的抗体分为第一组抗体和第二组抗体，其中第一组抗体和第二组抗体选自下组：

1)第一组抗体包括第一抗体，并且第二组抗体包括第二抗体和第三抗体；

2)第一组抗体包括第二抗体，并且第二组抗体包括第一抗体和第三抗体；

3)第一组抗体包括第三抗体，并且第二组抗体包括第一抗体和第二抗体；

优选地，第一组抗体为标记抗体，第二组抗体为包被抗体。

4.项目1-3任一项所述的试剂盒，其中所述抗体的反应性为ELISA评价OD₄₀₅≥0.5。

5.项目1-4任一项所述的试剂盒，其中所述标记抗体用可检测标记物和/或结合配偶体标记，可检测标记物例如金属粒子，荧光标记，发色团标记，电子致密标记，化学发光标记，放射性标记，或酶标记；例如可以是罗丹明，荧光素，荧光微球，胶体金，吖啶酯，荧光素酶，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶或葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记；结合配偶体例如是生物素/抗生物素蛋白，生物素/链霉抗生物素蛋白；例如标记抗体通过结合配偶体与可检测标记物进行标记。

6.项目1-5任一项所述的试剂盒，其中所述包被抗体连接至固相和/或结合配偶体，固相例如是磁性颗粒，胶乳粒子、微量滴定板、硝酸纤维素膜或微流控芯片；结合配偶体例如是生物素/抗生物素蛋白，生物素/链霉抗生物素蛋白；例如包被抗体通过结合配偶体与固相进行连接。