[发明专利]RNA文库的构建方法

权利要求书

1.一种RNA文库的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

采用逆转录引物对片段化的RNA进行逆转录，得到第一链cDNA，其中，所述逆转录引物从5’端至3’端依次包括：已知序列和随机序列；

采用环化酶将所述第一链cDNA进行单链接头连接，得到连接产物；

对所述连接产物进行PCR扩增，得到所述RNA文库；

所述环化酶为环化酶II或 T4 RNA 连接酶1，所述单链接头的5’端带有腺苷化修饰，3’端带有ddC修饰，所述单链接头的序列为SEQ ID NO:2。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述逆转录引物在所述已知序列的上游，还包有含间隔臂。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述随机序列为4~8碱基的随机序列。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述随机序列为6碱基的随机序列。

5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述间隔臂为Spacer C12、SpacerC6、Spacer C3、NH₂和ddC中的任意一种。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述逆转录引物的序列为SEQ ID NO:1。

7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，采用上游扩增引物和下游扩增引物对所述连接产物进行PCR扩增，得到所述RNA文库，所述上游扩增引物从5’端至3’端依次包括：上游测序平台序列、第一文库标签序列以及上游测序引物序列，所述下游扩增引物从5’端至3’端依次包括：下游测序平台序列、第二文库标签序列以及下游测序引物序列，其中，所述下游测序引物序列与所述逆转录引物的5’端的至少部分序列相同，所述上游测序引物序列与所述单链接头的5’端的至少部分序列相同。

8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，

所述第一文库标签序列和所述第二文库标签序列的长度分别为4~10bp。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述上游扩增引物的序列为SEQ IDNO:3，

所述下游扩增引物的序列为SEQ ID NO:4。

10.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述RNA为总RNA、mRNA、lncRNA或去除核糖体的RNA。