[发明专利]E184L基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株的构建及其作为疫苗的应用

权利要求书

1.非洲猪瘟病毒E184L蛋白在制备免疫抑制剂中的应用。

2.非洲猪瘟病毒E184L蛋白在制备抑制I型干扰素，和/或促炎性细胞因子，和/或干扰素刺激基因ISGs产生的药物或药物组合物中的应用。

3.通过缺失非洲猪瘟病毒E184L基因编码蛋白的功能制备减毒非洲猪瘟病毒株的应用，所述缺失非洲猪瘟病毒E184L基因编码蛋白的功能是指通过缺失非洲猪瘟病毒E184L基因的全部或部分核苷酸序列使非洲猪瘟病毒E184L基因编码蛋白的功能丧失。

4.一种E184L基因编码蛋白功能丧失的减毒非洲猪瘟病毒株，其特征在于，所述减毒非洲猪瘟病毒株包括将亲本非洲猪瘟病毒株E184L基因编码蛋白的功能丧失，所述将亲本非洲猪瘟病毒株E184L基因编码蛋白的功能丧失是指将非洲猪瘟病毒E184L基因的全部或部分核苷酸序列缺失。

5. 如权利要求4所述的E184L基因编码蛋白功能丧失的减毒非洲猪瘟病毒株，其特征在于，所述亲本非洲猪瘟病毒株为ASFV/CN/GS/2018分离株；所述E184L基因编码蛋白功能丧失的减毒非洲猪瘟病毒株相较于ASFV/CN/GS/2018分离株全长序列缺失了如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

6.一种非洲猪瘟疫苗，其特征在于，所述非洲猪瘟疫苗包含权利要求4-5任一所述的E184L基因编码蛋白功能丧失的减毒非洲猪瘟病毒株。

7.如权利要求4-5任一所述E184L基因编码蛋白功能丧失的减毒非洲猪瘟病毒株的制备方法，其特征在于，所述方法为：通过基因工程手段将亲本非洲猪瘟病毒株E184L基因的全部或部分核苷酸序列缺失使E184L基因编码蛋白的功能丧失。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法为同源重组技术，所述方法包括以下步骤：

（1）设计ASFV E184L基因上下游序列作为左右同源重组臂，并分别克隆入pUC19载体中，获得重组转移载体；

（2）在步骤（1）所述重组转移载体左、右臂基因序列中插入筛选表达盒基因片段，获得同源重组转移载体；

（3）将步骤（2）所述同源重组转移载体转染至感染了亲本非洲猪瘟毒株的 BMDM细胞，纯化筛选获得E184L基因编码蛋白功能丧失的减毒非洲猪瘟病毒株。

9.如权利要求7或8所述方法制备获得的E184L基因编码蛋白功能丧失的减毒非洲猪瘟病毒株。